换一批慢病毒重组ACE2基因表达载体的构建及其感染人脐静脉内皮细胞的研究
Construction,packaging of recombinant ACE2 gene lentiviral vector and its infection in human umbilical vein endothelial cells
摘要目的 构建携带血管紧张素转换酶2(ACE2)基因的慢病毒表达载体,观察其感染人脐静脉内皮细胞后ACE2基因的转录及表达水平.方法 采用PCR技术从含有ACE2基因的质粒克隆模板pcDNA3.1-hygro (+)-mACE2上钓取ACE2基因,并将ACE2基因重组到慢病毒载体表达质粒pGC-Fu中,构建重组慢病毒载体表达质粒pGC-FU-ACE2,通过酶切、测序验证ACE2基因后,将pGC-FU-ACE2质粒和包装质粒pHelper 1.0、pHelper 2.0共同转染人胚胎肾上皮细胞系293T细胞,获得携带ACE2基因的重组慢病毒Lentiviral-ACE2;然后感染人脐静脉内皮细胞,通过RT-PCR、Western-blot检测ACE2基因的转录和蛋白表达水平.结果 成功构建携带ACE2基因的慢病毒表达载体Lentiviral-ACE2,并获得大量高纯度的慢病毒浓缩液.目的基因ACE2能被重组慢病毒高效地导入人脐静脉血管内皮细胞,并能高水平表达.结论 慢病毒表达载体Lentiviral-ACE2成功构建并能高效率感染人脐静脉内皮细胞,为研究ACE2对血管内皮细胞的影响和更深入地探索ACE2基因的功能奠定了基础.
更多相关知识
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1672-5301.2010.03.020
发布时间
2010-04-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
福建省教育厅项目（JB08081）
- 浏览269
- 被引3
- 下载26
相似文献
- 中文期刊
- 外文期刊
- 学位论文
- 会议论文
