摘要目的 利用人细胞株,系统研究PCSK9是否通过肝源性MIF调控单核/巨噬细胞炎症反应,进而为动脉粥样硬化(Atherosclerosis)等炎症性疾病的临床防控提供新的思路和依据.方法 利用小干扰RNA(Small interfering RNA,SiRNA)介导的MIF基因转染THLE-3细胞,将实验分为MIF低表达组(Si-MIF-THLE-3)和MIF正常表达组(Con-THLE-3),通过实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,RT-qPCR)检测肝细胞中PCSK9、MIF mRNA表达.在Si-MIF-THLE-3组和Con-THLE-3组中分别给与PCSK9重组蛋白进行干预,通过Western Blot检测肝细胞中PCSK9、MIF蛋白表达,并用ELISA测定培养液中PCSK9及MIF的含量,并收集上述肝细胞的培养液,-80℃冻存.利用SiRNA介导的MIF基因转染THP-1细胞,将实验分为MIF低表达组(Si-MIF-THP-1)和MIF正常表达组(Con-THP-1),通过Western Blot检测MIF的蛋白表达.将收集的肝细胞培养液分别加入Si-MIF-THP-1和Con-THP-1组共培养48 h,其中PCSK9干预组另设TLR4特异性抑制剂TAK-242(1 μM)(P+T).通过ELISA检测炎症因子表达;Western Blot检测THP-1细胞株中TLR4—NF-κB信号通路的表达.结果 ①Si-MIF-THLE-3组较Con-THLE-3组的MIF mRNA表达显著降低,而PCSK9的mRNA表达升高(P均<0.05).②PCSK9干预后肝细胞MIF蛋白的表达以及分泌至培养液中的含量升高,而PCSK9蛋白的表达以及培养液中的含量不变(P均<0.05).③Si-MIF-THP-1组较Con-THP-1组的MIF蛋白表达显著降低(P均<0.05).④Si-MIF-THP-1组较Con-THP-1组炎症因子的表达低,PCSK9干预组较正常组和P+T组的炎症因子表达升高;PCSK9干预组较正常组和P+T组的TLR4蛋白表达升高;Si-MIF-THP-1组较Con-THP-1组的IKBα蛋白表达高,PCSK9干预组较正常组和P+T组的IKBα蛋白表达低;PCSK9干预组较正常组和P+T组的P65/P50蛋白表达高(P均<0.05).结论 PCSK9可诱导肝细胞MIF的合成与分泌,肝细胞分泌的MIF可与巨噬细胞表面受体TLR4结合,激活下游NF-κB炎症信号通路,促进TNF-α、白介-6、白介-1β、单核细胞驱化因子-1等炎症因子的分泌,激发炎症效应.