摘要目的 探索天然黄酮类化合物紫铆因通过靶向 kirre 样 nephrin 家族黏附分子 1(KIRREL1)调控 Hippo-Yes-相关蛋白(YAP)信号通路,进而发挥抑制动脉钙化的作用及机制.方法 采用 2.6 mmol/L 高磷高糖 DMEM 培养基诱导血管平滑肌细胞形成钙化细胞模型,通过转染KIRREL1 的 siRNA 及过表达质粒构建基因敲低与过表达的血管平滑肌细胞模型,给予紫铆因干预后,采用茜素红染色检测钙盐沉积,Western blot 法检测钙化指标骨形成蛋白 2(BMP-2)、Runt 相关转录因子 2(RUNX2),以及 KIRREL1 和 Hippo-YAP 信号通路的磷酸化 YAP 表达量.分子对接及动力学模拟验证紫铆因与靶蛋白 KIRREL1 的结合性以及结合能力.结果 体外实验表明,与对照组相比,钙化组茜素红染色钙沉积明显增加,KIRREL1 敲低可以促进钙化发生,KIRREL1 过表达具有抑制钙化的作用.分子对接结果显示紫铆因与 KIRREL1 之间可形成良好结合,其与 KIRREL1 上的 VAL-225 和 LEU-227 共形成 4 个氢键,结合能为-6.5 kcal/mol,结合力较强,提示 KIRREL1 可能是紫铆因抗钙化活性的关键蛋白,分子动力学模拟进一步验证了紫铆因-KIRREL1 复合体的稳定性.在高磷培养基中加入紫铆因可明显减轻血管平滑肌细胞钙化,与对照组相比,钙化组 BMP-2、RUNX2、KIRREL1 和磷酸化 YAP 蛋白表达均显著上升(均为 P<0.001),经紫铆因处理后,与钙化组相比,钙化相关蛋白 BMP-2、RUNX2 表达均显著下降(均为 P<0.01),KIRREL1 和磷酸化 YAP 蛋白表达显著上升(均为 P<0.01),表明紫铆因可能通过与 KIRREL1 结合促进 YAP 磷酸化从而抑制动脉钙化.结论 天然黄酮类化合物紫铆因可通过结合 KIRREL1 激活 Hippo-YAP 信号通路的抑制性调控,促进YAP 磷酸化并抑制其下游成骨样分化相关基因表达,从而发挥抗血管平滑肌细胞钙化作用.