大鼠骨髓间充质干细胞体外诱导分化为血管平滑肌样细胞的实验研究
Induction of Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells into Vascular Smooth Muscle-like Cells in Vitro
摘要目的 探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)作为构建小口径血管种子细胞的可行性及其诱导机制.方法 取体重100 g左右雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠后肢股骨和胫骨骨髓,采用原代全骨髓培养法,多次传代纯化,体外扩增后,观察细胞形态,并用免疫荧光及流式细胞仪检测CD34、CD90、CD105细胞因子,鉴定是否为BMSCs.将BMSCs分为实验组和对照组:实验组使用含全反式维甲酸及二丁酰环磷酸腺苷(db-cAMP)的低糖基本培养基(DMEM-LG)培养;对照组采用普通的DMEM-LG培养.观察诱导后细胞形态,检测诱导后第5代细胞平滑肌α-肌动蛋白(SM-α-actin)、钙结合蛋白(calponin)、平滑肌肌球蛋白重链(SMMHC)的表达情况.结果 原代培养所获取的细胞经过多次传代培养后呈长梭形,呈现特征性的漩涡状生长,检测CD34阴性,CD90、CD105阳性.实验组经诱导后的BMSCs生长较缓慢,略呈椭圆形,检测SM-α-actin、calponin、SMMHC显著表达;对照组的细胞形态及生长速度和实验组BMSCs相似,但不表达SM-α-actin、calponin和SMMHC.结论 BMSCs在全反式维甲酸的诱导下可向血管平滑肌样细胞表型分化,可为组织工程构建小口径血管提供平滑肌种子细胞.
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