换一批摘要目的 通过对葡激酶(SAK)基因序列进行定点突变、表达、纯化与进行聚乙二醇修饰以获得较高纯度的聚乙二醇化葡激酶(peg-SAK-cys),并对其溶栓活性与免疫原性初步进行验证.方法 根据SAK蛋白晶体结构及抗原位点选择突变位点,设计引物将所选的氨基酸突变为半胱氨酸.将突变质粒通过化学转化进入BL21 (DE3)感受态,并利用经典原核表达技术,在大肠杆菌中表达突变葡激酶(SAK-cys).利用镍离子交换柱、分子筛等方法分离纯化目的蛋白.用纤维蛋白平板溶圈法和血栓弹力图初步对其生物活性进行验证.以酶联免疫吸附(ELISA)法评价peg-SAK-cys的免疫原性.结果 成功获得了SAK-cys质粒,表达、纯化了突变蛋白,并进行聚乙二醇修饰获得了peg-SAK-cys,分离纯化后纯度在总蛋白质量的90％以上.计算其溶圈实验结果,活性为8.2×104 IU·mg-1;血栓弹力图实验结果提示其具有较高的溶栓活性;免疫原性测定结果提示peg-SAK-cys免疫原性低于野生型SAK (P=0.000 2).结论 通过位点特异性特变与聚乙二醇修饰技术的联合运用可以成功改造出有较低免疫原性的活性SAK.
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关键词
葡激酶氨基酸特征结构点突变聚乙烯二醇类免疫遗传学staphylokinaseamino acid motifspoint mutationpolyethylene glycolsimmunogenetics
分类号
R973.2（药品）
栏目名称
DOI
10.14109/j.cnki.xyylc.2017.04.005
发布时间
2017-06-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
重庆市科委项目（cstc2012gg-gjhz0025）
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