摘要目的:金属纳米粒子近年来在医药研究领域中展现出巨大的潜力,但其对人类的神经系统却存在一定的毒性风险.本研究采用人诱导多能干细胞(human induced pluripotent stem cells,hiPSC)分化的神经元细胞模型多终点评价40和70 nm粒径纳米银(silver nanoparticles,Ag-NPs)的神经毒性作用.方法:体外培养hiPSC来源的神经元细胞.给药72 h,采用CCK-8法检测神经元的细胞存活率,通过DCFH-DA荧光探针法检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,评价神经元氧化应激损伤,通过检测磷酸化组蛋白γH2AX评价神经元DNA损伤.分别在给药24和72 h,通过酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测细胞因子[肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor α,TNF-α),白细胞介素(interleukin,IL)-1β,IL-6]的释放水平,采用高内涵细胞成像技术评价Ag-NPs对神经突生长的影响.结果:40和70 nm Ag-NPs均表现出神经元的细胞毒性.40 nm Ag-NPs从12.5 μg·mL-1剂量水平起细胞存活率显著降低(P＜0.001),半数致死量(lethal dose 50％,LD50)值为 21.82 μg·mL-1;70 nm Ag-NPs 从 25 μg·mL-1 剂量水平起细胞存活率显著降低(P＜0.05),LD50值为 51.13 μg·mL-1.从 2.5 μg·mL-1 剂量起,40 和 70 nm Ag-NPs 可诱导神经元 ROS 水平和DNA损伤水平呈剂量相关性升高.40 nm Ag-NPs从2.5 μg·mL-1剂量水平起对神经突宽度、面积表现出抑制作用,70 nm Ag-NPs从10 μg·mL-1剂量水平起对神经突数量、长度、宽度和分支点数等均表现出抑制作用.本研究中,Ag-NPs作用后神经元细胞因子释放水平未见明显改变.结论:本研究构建了体外多终点评价Ag-NPs神经毒性的人源化神经细胞模型,有效评估了 2种粒径Ag-NPs对神经元的细胞毒性、氧化应激损伤、DNA损伤和神经突生长抑制作用,为Ag-NPs的临床安全使用剂量提供参考.