16S rDNA-变性梯度凝胶电泳技术与临床培养方法对比分析儿童阑尾炎组织菌群多样性

Comparative study on 16S rDNA-DGGE versus conventional clinical culture in analysis of children's appendicitis tissue bacterial floras

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摘要目的从分子生物学的角度初步探讨儿童阑尾炎组织的菌群多样性,为全面认识儿童阑尾炎病原菌提供新的视角.方法对10例阑尾炎组织标本和4例正常阑尾组织标本病理切片后,行革兰染色观察菌群情况,采用激光捕获显微切割技术(LCM)直视下分离组织中的细菌,经DNA提取、PCR扩增后,进行变性梯度凝胶电泳(DGGE)分析并与临床培养结果对比.结果 ①临床培养法:阳性率为70％,共检测到4个菌属,以大肠埃希菌最多见,各标本菌属0～2种,且均可由DGGE检出.②DGGE方法:共检测到14个菌属,包括可培养菌属和无法培养的菌属,以革兰阴性菌为主;10例阑尾炎标本包含的细菌种类和数目均有差异,各标本菌属平均9.6(6～12)种;变形菌门比例为73.9％.在正常阑尾组织中,各标本菌属数在2～7种,变形菌门比例为52.9％,且发现假单胞菌属、不动杆菌属等7个菌属仅在阑尾炎病灶中检出.结论阑尾炎病灶区是以革兰阴性菌为主的多种细菌混合感染,检测到的细菌种类较正常阑尾多.应用LCM联合PCR-DGGE技术病原菌检出率较高,可为组织病原学研究提供新的思路.