摘要目的 探讨心房颤动(简称房颤)犬心外膜脂肪组织(EAT)来源的外泌体对海马小胶质细胞的作用及其机制.方法 18只成年雄性比格犬随机分为假手术组、起搏组和GW4869组(每组n=6),假手术组植入起搏器不起搏,起搏组和GW4869组植入起搏器后450次/分快速起搏心房2周建立房颤模型,GW4869组起搏的同时静脉注射GW4869(外泌体合成/释放抑制剂,0.3 mg/kg,每日1次).各组犬左房游离壁EAT局部注射Ad-CD63-RFP示踪外泌体.超速离心法提取EAT的外泌体,通过RNA测序、实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测外泌体及海马组织的RNA,miRanda数据库预测及荧光素酶报告实验检验miRNA、mRNA之间的靶向关联;蛋白质免疫印迹检验EAT外泌体标志物(CD63、CD81、TSG101);免疫荧光检测EAT和海马组织中Ad-CD63-RFP,检测小胶质细胞激活标志物IBA-1.体外实验将小胶质细胞(BV2)分为对照组、模拟物NC组、模拟物组和抑制剂组,使用miRNA模拟物和抑制剂干预BV2,免疫荧光及qRT-PCR检测BV2细胞中的IBA-1及RNA.结果 快速心房起搏增加房颤的易感性和EAT外泌体的释放,起搏组Ad-CD63-RFP转染EAT的病毒荧光高于假手术组和GW4869组(P<0.001),且GW4869组高于假手术组(P<0.05);蛋白质免疫印迹分析显示起搏组的EAT外泌体标志物(CD63、CD81、TSG101)高于假手术组(P<0.001);起搏组海马Ad-CD63-RFP和小胶质细胞激活标志物IBA-1的荧光强度高于假手术组(P<0.001),外泌体抑制剂逆转了外泌体分泌和小胶质细胞激活.RNA测序显示EAT外泌体的差异基因cfa-miR-22e明显上调,其靶基因IL-33在海马组织下调.荧光素酶实验结果显示cfa-miR-22e-IL-33 WT组(0.41±0.07,n=5)293T细胞荧光素酶信号明显低于miRNA-NC-IL-33 WT组(1.05±0.10,n=5,P<0.001)和cfa-miR-22e-IL-33 MUT组(1.00±0.10,n=5,P<0.001),提示cfa-miR-22e与IL-33存在靶向关系.qRT-PCR结果显示起搏组犬EAT外泌体和海马组织中cfa-miR-22e的水平高于假手术组和GW4869组(P<0.001),且GW4869组高于假手术组(P<0.001).起搏组犬海马组织中IL-33的水平低于假手术组和GW4869组(P<0.001),GW4869组低于假手术组(P<0.001).摸拟物组BV2细胞中cfa-miR-22e水平高于对照组、摸拟物NC组和抑制剂组;摸拟物组BV2细胞中IL-33水平低于对照组、摸拟物NC组和抑制剂组.结论 房颤犬EAT分泌包含cfa-miR-22e的外泌体在海马区分布,通过cfa-miR-22e/IL-33信号通路激活海马小胶质细胞.