换一批
换一批重组人源胰岛素原C肽在大肠杆菌中的克隆、表达与纯化
Cloning,expression and purification of recombinant human proinsulin C-peptide in E.coli
摘要目的:构建一种新型表达载体(pEDCC),表达并纯化得到人源胰岛素原C肽.方法:将编码截短的门冬酰胺酶突变体(ansB-C),天然C肽,人IgG1铰链区(hinge),额外的酸敏感二肽(DP)以及富含碱性氨基酸的8肽(KRKRKKSR)的核苷酸序列依次分别插入pET28a载体中,构建表达载体pEDCC.在乳糖的诱导下,融合蛋白ansB-C-hinge-DPKRKRKKSRNGSGR-C-peptide以包涵体形式高效表达.融合蛋白经洗涤和乙醇分级沉淀纯化后,通过酸水解将PKRKRKKSRNGSGR-C-peptide释放出来.C肽N端14肽用胰蛋白酶切割,通过DE52柱与C-peptide分离.结果:构建的表达载体pEDCC序列正确,融合蛋白经分离纯化得到了高纯度的重组人源胰岛素原C肽.结论:以截短的门冬酰胺酶作为融合伙伴,并以富含碱性氨基酸的8肽调节等电点是一种生产重组人源胰岛素原C肽的有效方法.
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关键词
重组人源胰岛素原C肽基因融合表达与纯化门冬酰胺酶胰蛋白酶recombinant human proinsulin C-peptidegene fusionexpression and purificationasparaginasetrypsin
分类号
R944
栏目名称
论文
DOI
10.3321/j.issn:1000-5048.2006.02.018
发布时间
2006-05-18
基金项目
国家科技攻关项目
中国科学院资助项目
江苏省自然科学基金
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