东亚钳蝎Na+通道毒素BmkNaTx12的基因克隆与重组表达

Cloning and expression of recombinant BmkNaTx12, a new voltage-gated sodium channel from scorpion Buthus martensii Karsch

二维码有效期 120s

摘要利用野生东亚钳蝎毒腺构建cDNA文库,并通过序列比对确定了一条全新的Na+通道长链毒素BmkNaTx12并克隆出其全长cDNA序列.序列比对显示BmkNaTx12的序列与墨西哥毒蝎的β-毒素Cn12具有较高的结构相似性,通过同源模型构建并选取打分最高的模型得到BmkNaTx12的预测结构,经分子动力学优化发现蛋白结构在300 ns趋于稳定,而蛋白20、35、52个氨基酸处的波动很可能由于这些氨基酸所处位置在loop区域导致.进一步构建了BmkNaTx12-Fc融合蛋白重组表达系统,通过Western blot技术确定重组蛋白最佳表达时间,并在HEK293细胞中成功表达出BmkNaTx1 2-Fc融合蛋白.经蛋白A亲和色谱纯化后获得的重组融合蛋白经SDS-PAGE凝胶电泳及高效液相鉴定后纯度高达95％.此外,全细胞膜片钳实验结果显示:BmkNaTx12-Fc在1μmol/L浓度下能增大20％ Nav1.7峰电流.研究结果为后续的生物学功能研究奠定了理论基础.

作者夏扬 ^[1] 胡玲玲 ^[1] 陈姣 ^[1] 卢悟广 ^[1] 颜怀江 ^[1] 霍介格 ^[1] 曹鹏 ^[1] 学术成果认领

作者单位南京中医药大学附属省中西医结合医院,南京210023;江苏省中医药研究院细胞与分子生物实验室,南京210028 ^[1]

关键词东亚钳蝎蝎毒素基因克隆表达 Na+通道 Buthus martensii Karsch scorpion toxin gene cloning expression Na+ channel

主题词蝎(Scorpions)远东(Far East)基因(Genes)蛋白(Egg White)蝎毒素(Charybdotoxin)

分类号 R931.74 R34 R966

栏目名称论文

DOI 10.11665/j.issn.1000-5048.20170214

发布时间 2017-07-31

基金项目

基金项目2015年度公益性行业科研专项经费项目 国家自然科学基金资助项目 江苏省自然科学基金资助项目(No.BK20140049)This study was supported by Quality Guarantee System of Chinese Herbal Medicines the National Natural Science Foundation of China the Natural Science Foundation of Jiangsu Province for Distinguished Young Scholars