DC靶向适配体修饰的载铜绿假单胞菌DNA疫苗递送系统的构建及体外评价

Construction and in vitro evaluation of DC-targeted aptamer-modified Pseudo-monas aeruginosa DNA vaccine delivery system

二维码有效期 120s

摘要构建了一种DC靶向适配体修饰的铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)DNA疫苗递送系统.采用乙醇注入法制备阳离子脂质体,静电吸附法制备载pVAX1-OprF-VP22的阳离子脂质体(Lip-pOprF-VP22),探讨不同DOTAP/pDNA质量比的Lip-pOprF-VP22对pVAX1-OprF-VP22的包封效果、对DC2.4的细胞毒性及转染率,筛选最佳质量比的Lip-pOprF-VP22测定其粒径及Zeta电位;后插法制备DC靶向适配体修饰的载pVAX1-OprF-VP22的阳离子脂质体(Apt-Lip-pOprF-VP22),检测其转染DC2.4后OprF蛋白的表达量及对小鼠骨髓来源树突状细胞(bone marrow-derived dendritic cells,BMDCs)成熟的影响.结果表明,Lip-pOprF-VP22随着DOTAP/pDNA质量比增加包封率逐渐增加,当质量比为5:1时即能很好的包封pVAX1-OprF-VP22;当Lip-pOprF-VP22作用于DC2.424 h或48 h后,不同质量比的Lip-pOprF-VP22对DC2.4的存活率均在80％以上;当DOTAP/pDNA质量比由2:1增加到10:1,转染率表现为先增加、后降低的趋势,其中DOTAP/pDNA质量比为4:1、5:1时转染率相对较高;当DOTAP/pDNA质量比为5:1时,Lip-pOprF-VP22粒径为(171.67±1.27)nm,Zeta电位为(11.30±0.57)mV;Apt-Lip-pOprF-VP22转染DC2.4后可表达更多OprF蛋白且可明显促进BMDCs的成熟.