四物汤含药血清对多囊卵巢综合征卵巢颗粒细胞自噬的影响
Effects of medicated serum of Siwutang on autophagy of ovarian granulosa cells in polycystic ovarian syndrome
摘要目的 探讨四物汤含药血清对多囊卵巢综合征(PCOS)卵巢颗粒细胞自噬的影响及潜在机制.方法 取3月龄雌性SD大鼠,分别以生理盐水和不同剂量四物汤灌胃,制备空白血清和不同浓度[0.52、1.04、2.08 g/(kg·d)]四物汤含药血清.筛选四物汤含药血清干预浓度后,将人卵巢颗粒细胞KGN分为对照组(细胞不进行任何处理)、脱氢表雄酮(DHEA)组(以50 μmol/L的DHEA处理细胞48 h)、空白血清组(以50 μmol/L的DHEA处理细胞48 h后,再用10%空白血清处理72 h)、中浓度四物汤含药血清组(以50 μmol/L的DHEA处理细胞48 h后,再用10%中浓度四物汤含药血清处理72 h),观察各组细胞中的自噬体数量以及通路相关蛋白[果糖-1,6-二磷酸酶1(FBP1)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、磷酸化mTOR(p-mTOR)]、自噬相关蛋白[p62、微管相关蛋白1轻链3(LC3)]和FBP1 mRNA的表达水平.将(转染)细胞分为四物汤组(以50 μmol/L的DHEA处理细胞48 h后,再用10%中浓度四物汤含药血清处理72 h)、四物汤+si-NC组(以50 μmol/L的DHEA处理阴性对照小干扰RNA转染细胞48 h后,再用10%中浓度四物汤含药血清处理72h)、四物汤+si-FBP1组(以50 μmol/L的DHEA处理FBP1小干扰RNA转染细胞48 h后,再用10%中浓度四物汤含药血清处理72 h),考察敲低FBP1对四物汤上述作用的影响.结果 与对照组比较,DHEA组细胞的自噬体数量明显增加,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、p-mTOR/mTOR、FBP1蛋白及mRNA的表达水平均显著升高,p62蛋白的表达水平显著降低(P<0.05).与DHEA组和空白血清组比较,中浓度四物汤含药血清组细胞的自噬体数量明显减少,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ显著降低,p-mTOR/mTOR和p62蛋白、FBP1蛋白及mRNA的表达水平均显著升高(P<0.05).敲低FBP1后,与四物汤+si-NC组比较,四物汤+si-FBP1组细胞的存活率、p62蛋白的表达水平、FBP 1蛋白及mRNA的表达水平、p-mTOR/mTOR均显著降低,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ显著升高(P<0.05).结论 四物汤可通过上调KGN细胞中FBP1蛋白及mRNA的表达来促进mTOR蛋白的磷酸化,从而抑制其自噬.
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