马传染性贫血病病毒驴白细胞弱毒疫苗株前病毒全基因组核苷酸序列分析
Complete Sequence of Proviral DNA of EIAV Chinese Donkey Leukocyte Attenuated Strain
摘要马传染性贫血病病毒(EIAV)是马传染性贫血病(简称马传贫,EIA)的病原。我国的EIAV弱毒疫苗是迄今为止世界上唯一投入应用的慢病毒疫苗,成功地控制了我国EIA的流行。本研究从EIAV弱毒疫苗株(DLA)感染的驴白细胞中提取前病毒DNA,以提取的前病毒DNA为模板,利用PCR技术分3个片段扩增EIAV前病毒,这3个片段覆盖全部前病毒DNA。将这3个片段分别克隆到载体质粒pBluescrtipt sK中,得到3个重组质粒P2.8,P2.4,P4.1,经酶切鉴定后,测序。对测序结果分析、拼接,得到EIAV驴白细胞弱毒疫苗株前病毒基因组全序列。EIAV DLA株前病毒基因组全长8266bp。基因组两端是长为334bp的LTR,其中U3为214 bp,R为81 bp,U5为39bp。前病毒基因组有3个较大的开放阅读框架(ORF),分别编码gag、pol和env基因。gag基因位于732~1931位碱基之间,全长1200bp;pol基因位于1727~5128位碱基之间,全长3402bp;env基因位于5324~7912之间,长为2589bp。此外前病毒还有3个小的ORF,Sl位于5132~5284位碱基之间,长为153bp;S2位于5298~5501位碱基之间,长为204bp;S3位于7258~7659位碱基之间,长为402bp。本研究结果为进一步确定EIAV的基因功能、揭示马传贫疫苗毒的致弱及免疫机理奠定了基础。
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