换一批检测蜜蜂囊状幼虫病毒环介导等温扩增技术的建立
Visualized detection of Sacbrood virus by real-time loop-mediated isothermal amplification assay
摘要为建立一种快速检测蜜蜂囊状幼虫病毒(SBV)的环介导等温扩增方法(LAMP),本研究根据SBV-UK株多聚蛋白基因序列(AF092924.1)设计了4条特异性引物,通过LAMP real-time Turbidimeter仪对SBV的反应体系和反应条件进行检测和实时监控,并评价其特异性、敏感性、重复性和稳定性.结果显示,在63℃恒温扩增40 min后,仅SBV核酸扩增,而其他病毒均呈阴性.反应结束后在反应体系中加入SYBR Green Ⅰ的可视化判定结果与real-time Turbidimeter仪检测结果一致;该方法具有较强的特异性和较高的敏感性,其最低检出量为3.2×101拷贝/μL,是普通PCR的100倍;对同一批次和不同批次提取的SBV核酸进行扩增,结果表明重复性和稳定性良好;临床样品检测结果表明LAMP法与常规PCR法检测结果一致.本研究建立的LAMP方法操作简便,适用于SBV的快速检测.
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