换一批致禽肾脏、肠道病变大肠杆菌菌影的制备及其裂解效率的测定
Production and lysis efficiency of ghosts of the Escherichia coli induced nephritis and enteritis in chicken
摘要为制备高裂解效率的致禽肾脏、肠道病变大肠杆菌菌影,本研究通过编码15个柔性氨基酸linker采用融合PCR法将噬菌体中Φ174的裂解蛋白E基因和金黄色葡萄球菌核酸酶A基因(SN)串联(E-15L-SN),插入温控表达质粒pBV220,构建重组温控双裂解表达质粒(pBV-ES),采用PCR扩增其温控双基因裂解表达盒(DLS-ES)插入E.coli-Pasteurella(大肠杆菌和巴氏杆菌)穿梭质粒pBA1100,构建重组温控双基因裂解穿梭质粒pBA1100-DLS-ES.该质粒可以通过温控制备高裂解率的E.coli和Pasteurella两种菌的菌影.本实验将构建的pBA1100-DLS-ES电转化至致禽肾脏、肠道病变E.coli中,28℃集菌,42℃温控诱导裂解蛋白E和核酸酶A表达.OD600mm值及电镜结果表明,双基因裂解率高于单基因,同时收集菌影时间也比单基因裂解短,42℃诱导2h含双裂解基因的菌液处理菌体裂解率达到99.9999％,本实验利用菌影形成机制将含青霉素抗性的致禽肾脏、肠道病变E.coli制备成菌影,为新型菌影疫苗的制备提供实验依据.
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关键词
裂解基因E核酸酶A致禽肾脏、肠道病变大肠杆菌菌影穿梭质粒lysis gene Enuclease Aghost of E.coli induced nephritis and enteritis of chickenshuttle vector
分类号
S852.61
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1008-0425.2017.03.05
发布时间
2017-05-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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