换一批基于DPO引物检测猪流行性腹泻病毒荧光定量RT-PCR方法的建立及初步应用
Development and preliminary application of a DPO-based fluorescent quantitation RT-PCR method for detection of porcine epidemic diarrhea virus
摘要为建立快速、准确检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)的方法,本研究以PEDV的N基因为靶基因,基于双启动寡核苷酸引物(DPO),经过条件优化,建立了检测PEDV的荧光定量RT-PCR方法.结果 显示,DPO引物的有效退火温度范围较宽(45℃～65℃);在测试的10种病毒中仅PEDV为阳性扩增结果,其余病毒为阴性结果,特异性较强;对PEDV质粒标准品的检测限可达1.64×101拷贝/μL,敏感性较高;组内、组间重复性结果的变异系数均小于1％,重复性较好.利用该方法对采集的272份临床仔猪腹泻样品(粪便、小肠组织)进行检测,结果显示,共检出PEDV阳性样品39份,阳性率为14.34％,与常规RT-PCR方法检测结果的阳性符合率为92.31％;本研究建立方法检测的阳性样品经PEDV N基因测序鉴定,确实均为PEDV阳性样品.本研究建立的基于DPO引物检测PEDV的荧光定量RT-PCR方法为PEDV的准确检测和流行病学调查提供技术支持.
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