换一批非洲猪瘟病毒DP148R蛋白单克隆抗体的制备与鉴定
Preparation and identification of monoclonal antibody against African swine fever virus DP148R protein
摘要为制备非洲猪瘟病毒(ASFV)DP148R蛋白的单克隆抗体(MAb),本研究构建了重组原核表达质粒pET-28a-DP148R,通过PCR和测序鉴定正确后经原核表达并纯化了重组DP148R蛋白,将其按常规方法免疫BALB/c小鼠,取小鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,通过ELISA方法筛选,获得一株能稳定分泌DP148R蛋白MAb的杂交瘤细胞株7D6.采用间接ELISA方法检测了该MAb的抗体效价,利用DP148R截短表达的各重组蛋白为抗原,采用western blot方法鉴定了该MAb识别的抗原表位,通过western blot和间接免疫荧光试验(IFA)鉴定了该MAb的反应原性.鉴定结果显示,纯化的MAb效价高于1:105,MAb 7D6为IgG2b亚型,该MAb识别的线性抗原表位为29LYWVFRAIHI38;分别采用western blot和IFA两种方法鉴定,结果均显示,纯化的MAb既能够特异性识别HEK293T细胞中表达的Flag-DP148R蛋白,也能够识别ASFV感染的PAMs细胞中表达的DP148R蛋白,反应原性较强.本研究制备的ASFV DP148R蛋白MAb可以为ASF诊断方法的建立以及DP148R蛋白的生物学功能研究提供参考依据.
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