换一批犬圆环病毒荧光RAA检测方法的建立及初步应用
Establishment and preliminary application of a real-time recombinase-aid amplification assay for detection of canine circovirus
摘要为建立一种高效、简便的犬圆环病毒(CCV)的检测方法,本研究针对CCV Rep基因设计了特异性引物和探针,同时构建了基于该病毒Rep基因的重组质粒标准品pCCV-Rep,经过优化后确定了CCV重组酶介导核酸等温扩增(RAA)检测方法引物、探针的最适浓度均为10μmol/L,在39℃恒温条件下20 min即可完成检测.利用该方法检测犬圆环病毒、狂犬病病毒、犬细小病毒、犬瘟热病毒、犬副流感病毒、犬腺病毒等其他常见的犬源病毒,结果显示除CCV外,该方法对其他病毒均无交叉反应,特异性较强;将pCCV-Rep分别稀释为106拷贝/μL～100拷贝/μL后作为模板,进行敏感性试验,结果显示该方法最低检出限可达102拷贝/μL,敏感性较高;批内批间重复性试验结果均表明该方法具有良好的重复性.采用该方法与常规PCR方法同时检测82份犬粪便拭子,结果显示,该RAA方法检出阳性样品5份,检测结果与常规PCR一致.本实验首次建立的CCV荧光RAA检测方法简便、高效、特异、灵敏,为CCV的临床筛查与流行病学研究提供了可行技术.
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