换一批基于重组酶介导等温扩增技术的羊口疮病毒核酸检测方法的建立及初步应用
Establishment and preliminary application of a nucleic acid detection method for Orf virus based on recombinase-mediated isothermal amplification technology
摘要为建立羊口疮病毒(Orfvirus,ORFV)核酸的快速检测方法,本研究根据ORFV B2L基因保守序列设计特异性引物,通过优化反应温度与时间初步建立了基于重组酶介导等温扩增技术(RAA)的ORFV检测方法.优化试验结果显示:该方法在37 ℃反应40 min检测效果最佳.采用该方法对ORFV、山羊痘病毒、O型和A型口蹄疫病毒、小反刍兽疫病毒、山羊副流感病毒3型等临床常见症状相似的病毒核酸检测,结果显示:该方法除对ORFV的检测结果为阳性外,对羊的其他病毒的检测结果均为阴性,特异性较强.将质粒标准品10倍倍比稀释(1×109拷贝/μL～1×100拷贝/μL)后为模板,利用本研究建立的RAA方法检测,结果显示:该方法对ORFV质粒标准品的最低检测限为1×104拷贝/μL,敏感性较高.利用本研究建立的方法对95份临床样品(15份组织样品和80份血液样品)检测,结果显示:该RAA方法能够对临床样品快速检测,组织样品和血液样品的阳性率分别为33.33％(5/15)和6.25％(5/80),该检测结果与普通PCR检测方法的符合率均为100％,表明本实验建立的RAA方法能够满足临床样品的检测需求.本研究建立的ORFV RAA方法具有操作简单、特异性强、反应快速等特点,为ORFV的快速检测提供新的技术选择.
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