大熊猫源奇异变形杆菌、肺炎克雷伯菌、大肠杆菌多重PCR检测方法的建立及应用

Establishment and application of multiplex PCR detection method for Proteus mirabilis,Klebsiella pneumoniae and Escherichia coli from giant panda

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摘要为建立一种快速鉴别检测大熊猫3种病原菌的多重PCR方法,本研究根据NCBI登录的奇异变形杆菌(PM)ureR基因、肺炎克雷伯菌(KPN)phoE基因、大肠杆菌(E.coli)phoA基因,设计3对引物,并对各反应条件优化,初步建立检测大熊猫源PM、KPN和E.coli的多重PCR方法.特异性结果显示,本研究建立的多重PCR方法对PM、KPN和E.coli能够分别扩增到308 bp、456 bp和666 bp的目的条带,而对大熊猫常见的其它20种病原菌均无扩增;敏感性试验结果显示,该方法对PM、KPN和E.coli DNA的检测限分别为2.8×107拷贝/μL(ureR)、3×107拷贝/μL(phoE)、6×107拷贝/μL(phoA).利用本研究建立的多重PCR方法对100份大熊猫临床样品检测,结果显示:PM、KPN和E.coli的检出率分别为30％(30/100)、90％(90/100)和100％(100/100),均与研究报道的单一PCR检出率相同,对PM和KPN的检出率均高于传统病原分离方法(25％、83％).本研究建立的大熊猫源PM、KPN、E.coli多重PCR检测方法特异性较强、敏感性较高,且可以同时检测3种病原,为大熊猫细菌性疾病的诊断提供了新的检测手段,极大缩短了检测时间,对临床防控相应细菌性疾病具有重要意义.

作者刘圣 ^[1] 郑维超 ^[2] 黄虹秀 ^[3] 刘颂蕊 ^[4] 杨梅 ^[4] 燕霞 ^[4] 李运莉 ^[4] 岳婵娟 ^[4] 侯蓉 ^[4] 张东升 ^[4] 范雪阳 ^[4] 张洪文 ^[4] 李林 ^[4] 曹立亭 ^[5] 苏小艳 ^[4] 学术成果认领

作者单位西南大学动物医学院,重庆荣昌 402460;成都大熊猫繁育研究基地四川省濒危野生动物保护生物学重点实验室,四川成都 610081 ^[1] 四川大熊猫科学研究院,四川成都 610081 ^[2] 大熊猫国家公园广元管理分局,四川广元 628000 ^[3] 成都大熊猫繁育研究基地四川省濒危野生动物保护生物学重点实验室,四川成都 610081 ^[4] 西南大学动物医学院,重庆荣昌 402460 ^[5]

关键词大熊猫奇异变形杆菌肺炎克雷伯菌大肠杆菌多重PCR giant panda Proteus mirabilis Klebsiella pneumoniae Escherichia coli multiplex PCR

分类号 S852.61

栏目名称 诊断和检测技术

DOI 10.3969/j.issn.1008-0589.202211013

发布时间 2024-01-04

基金项目

成都大熊猫繁育研究基金 成都大熊猫繁育研究基地自立课题 成都大熊猫繁育研究基地自立课题 国家林业和草原局和四川省财政厅资金(圈养及野外大熊猫重大疾病防控研究)