换一批牛溶血性曼氏杆菌对BT细胞炎症因子及其TLR4/NF-κB信号通路影响的研究
Effects of bovine Mannheimia hemolytica on cytokines and its TLR4/NF-κB signaling pathway in BT cells
摘要为探究牛溶血性曼氏杆菌(Mh)感染新生牛鼻甲(BT)细胞是否发生炎症反应及其涉及的信号通路,本研究将不同浓度的Mh分别感染BT细胞后经MTT法检测Mh对BT细胞的毒性作用,确定合适的感染浓度.结果显示,与空白对照细胞相比,以终浓度1×104 cfu/mL、1×105 cfu/mL的Mh感染后BT细胞的存活率均在80%以上;以浓度1×106 cfu/mL的Mh感染BT细胞后的细胞存活率在60%～70%,以终浓度1×107 cfu/mL的Mh感染BT细胞后的细胞存活率在50%以下;因此确定终浓度1×106 cfu/mL为Mh的最适感染浓度.将Mh以终浓度1×106 cfu/mL感染BT细胞后,采用荧光定量PCR(qPCR)检测细胞中细胞因子(IL-1β、IL-6及TNF-α)mRNA的转录水平;采用间接ELISA检测细胞上清中上述各细胞因子的分泌水平;通过western blot检测BT细胞中TLR4/NF-κB通路中Toll样受体4(TLR4)、p-P65、磷酸化NF-κB抑制蛋白(p-IκBα)的表达水平.qPCR和间接ELISA结果显示,Mh感染的BT细胞中促炎因子IL-6、IL-1β、TNF-α mRNA转录水平及蛋白分泌水平均极显著高于空白对照细胞(P<0.001).Western blot结果显示,与空白对照组相比,Mh感染的BT细胞中TLR4、p-P65蛋白的表达水平显著升高(P<0.05),p-IκBα蛋白的表达水平极显著降低(P<0.01).本研究首次表明,Mh感染诱导BT细胞发生了炎症反应,并且该炎症反应是通过激活TLR4/NF-κB信号通路及其相关蛋白的表达实现的.本研究为Mh发病机制的研究及其所致疾病的防治提供参考依据.
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关键词
牛溶血性曼氏杆菌NF-κB信号通路炎症细胞因子新生牛鼻甲细胞Mannheimia haemolyticaNF-κB pathwayinflammatory cytokineneonatal bovine turbinate cell
分类号
S852.61
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1008-0589.202303026
发布时间
2024-02-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家科技支撑计划（2014BAD13B03-1）
黑龙江省农垦总局十三五重点科技计划项目（HNK135-04-03）
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