天津地区中华绒螯蟹及养殖环境中二尖梅奇酵母流行情况调查
Investigation on the prevalence of Metschnikowia bicuspidata in Eriocheir sinensis and culture environment in Tianjin area
摘要为探究近年天津地区中华绒螯蟹(河蟹)"牛奶病"病原二尖梅奇酵母的感染情况及传播特点,本研究于2020年~2022年间,从天津地区稻蟹综合种养殖企业和育苗场采集各生长阶段河蟹样品(包括溞状幼体、大眼幼体、种蟹等)236批共8 163只,环境样品51批共116份(包括养殖水体、底泥、稻田野杂鱼虾等).将处理过的上述样品涂布孟加拉红固体平板,28℃培养48 h后观察菌落形态.采用PCR检测上述样品及疑似菌落中的二尖梅奇酵母并测序比对.结果显示,部分样品在固体平板上长出乳白色、边缘光滑、不透明的圆形菌落,镜检观察可见菌体长约3 μm~7 μm,呈大量多边出芽生殖的圆形或卵圆形.PCR结果显示部分样品出现339 bp的目的条带,测序后于NCBI数据库中比对结果显示,测序片段与二尖梅奇酵母相应基因序列高度一致.统计结果显示,河蟹样品总阳性率14.71%(1 201/8 163)、批次阳性率34.32%(81/236),养殖环境样品总阳性率12.07%(14/116)、批次阳性率13.73%(7/51).根据PCR检测结果按月份统计2020年~2022年间河蟹二尖梅奇酵母的阳性率,分析该病原感染的季节流行规律;在该病原流行季节,按年份统计该病原的阳性率以分析该病原的流行趋势.对河蟹养殖环境经PCR检测该病原,并结合不同生长阶段河蟹及其环境样品的PCR检测结果,分析二尖梅奇酵母的传播途径,并分析该病原感染对河蟹养殖经济效益的影响.结果显示:3、4、5、6月份养殖河蟹的个体阳性率分别为26.22%(392/1495)、52.7%(293/556)、58.37%(408/699)和10.24%(43/420),批次阳性率分别为55.56%(25/45)、80.95%(17/21)、83.33%(25/30)和26.32%(5/19),其中4、5月份个体阳性率和批次阳性率均显著高于其他月份(P<0.05),7月~11月未检到该病原;对2020年~2022年每年3月~6月该病原感染河蟹的统计结果显示,2020年、2021年、2022年越冬后河蟹个体阳性率分别为37.17%(139/374)、43.69%(814/1863)、25.19%(235/933),2022年个体阳性率较2021年显著降低(P<0.05);越冬后二尖梅奇酵母感染河蟹的批次阳性率较高,2020年、2021年、2022年批次阳性率分别为86.67%(13/15)、71.43%(45/66)、44.12%(15/34),呈逐年下降趋势.河蟹养殖环境的PCR检测结果显示,当年春季暴发"牛奶病"的暂养池水体和底泥中检出大量二尖梅奇酵母,而上一年发病暂养池的上述样品及稻田野杂鱼虾中均未检到该病原.不同生长阶段河蟹及其环境样品检测结果显示,二尖梅奇酵母在育苗期间种蟹中的样品阳性率达36.11%(65/180),批次阳性率达90%(9/10),但在溞状幼体、大眼幼体中均未检到该病原.感染二尖梅奇酵母的扣蟹(感染率在26.92%以上)虽未发生"牛奶病",但当年成蟹同比缩小30%~50%,产量降低30%以上.上述结果表明,天津地区二尖梅奇酵母感染河蟹时期为每年3月~6月,其中4月~5月为感染高峰期,且感染率呈逐年下降趋势;水平传播是二尖梅奇酵母的主要传播方式,未发现垂直传播途径;感染该病原后严重影响河蟹养殖的经济效益.本研究为了解中华绒螯蟹"牛奶病"病原的流行规律和传播途径,并为制定该病的有效防控措施提供了参考依据.
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