摘要为探究单增李斯特菌(LM)磷酸转移酶系统(PTS)转运蛋白IIBman在LM生长、运动性及其生物学功能,本研究以LM EGD-e株基因组为模板,经PCR扩增iiBman基因的上下游基因片段(不包含iiBman基因),插入质粒pKSV7以构建缺失质粒;以LM EGD-e基因组为模板,采用PCR扩增iiBman基因与启动子片段,插入质粒pIMK2以构建回补质粒,经PCR和测序鉴定后,将缺失质粒转化LM EGD-e感受态细胞,通过氯霉素抗性及42℃压力下使重组质粒与LM EGD-e株的同源片段发生同源重组单交换获得一代同源重组菌株,然后在无抗性培养基中30℃培养使质粒丢失,获得缺失株ΔiiBman.将回补质粒转化ΔiiBman感受态细胞中,通过卡那霉素抗性筛选获得回补株CΔiiBman,缺失株和回补株均经PCR和测序鉴定.37℃培养EGD-e、ΔiiBman、CΔiiBman 12 h,期间每隔1 h测定OD600nm并绘制生长曲线,分析各菌株生长特性,结果显示,各菌株体外生长趋势相似.将各菌株菌液接种于TSA半固体培养基,培养至24 h和48 h时检测细菌运动圈大小,结果显示ΔiiBman的运动圈直径分别是EGD-e的1.5及1.6倍(P<0.05、P<0.01),CΔiiBman与EGD-e运动圈直径均基本一致.在各菌株培养上清中加入绵羊血,检测各菌株溶血能力,结果显示,ΔiiBman的溶血能力较EGD-e及CΔiiBman增强.将各菌株以MOI 20感染RAW264.7细胞,在感染后2 h、5 h和8 h收集细胞进行点样计数,结果显示,在感染后2 h和5 h时ΔiiBman的胞内增殖能力较EGD-e及CΔiiBman显著增强(P<0.05).将各菌株以2×105 cfu/只经腹腔注射感染小鼠48 h后剖杀,取肝脏和脾脏研磨并点样计数,结果显示,ΔiiBman在小鼠脏器载菌量较EGD-e及CΔiiBman极显著增多(P<0.001).上述结果首次表明IIBman不影响LM的生长,但影响LM的运动性及提高LM的体外溶血活性;IIBman参与LM的胞内增殖和宿主脏器定植.本研究为了解LM PTS系统所介导的细菌体外环境适应及宿主感染的分子机制,以及LM感染的防控奠定了基础.