换一批快速检测十足目虹彩病毒1 RPA-LFD方法的建立及初步应用
Rapid visual detection of DIV1 by combinase recombinase polymerase amplification with lateral flow dipstick
摘要为建立一种高效、快速、简便的十足目虹彩病毒1(DIV1)检测方法,本研究以DIV1 ATPase基因为检测靶标,设计特异性引物和探针,采用方阵法优化反应温度和时间,结果显示,重组酶聚合酶扩增技术(RPA)最优反应温度为37℃,时间为15 min,结果观察时间为5 min,检测过程总时长为20 min,初步建立了DIV1的重组酶聚合酶扩增技术结合侧向流试纸条方法(RPA-LFD).提取其他7种常见虾类病原基因组与DIV1基因组,采用该方法检测,分析其特异性;构建重组质粒标准品pUC57-DIV1,10倍倍比稀释后采用该方法检测,分析其灵敏性;以3种不同浓度的重组质粒标准品为模板进行批间、批内重复性试验.结果显示,该方法能特异性检测DIV1,与虾类其他常见易感病原均无交叉反应;其对重组质粒标准品的检测限为1×101拷贝/μL;批内和批间重复性试验的检测结果均一致,重复性好.利用该方法与已发表的荧光定量PCR(qPCR)同时检测15份感染DIV1的罗氏沼虾样品及40份临床样品,结果显示,该方法的阳性检测率为69.09%(38/55),阴性率为30.91%(17/55),与qPCR检测结果一致,二者的阳性符合率、阴性符合率、总符合率均为100%.综上所述,本研究建立的RPA-LFD方法检测DIV1具有快速、简便、灵敏度高且特异性强的特点,且不需要精密昂贵的仪器设备,为基层实验室及现场检测提供了可行技术手段.
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关键词
重组酶聚合酶扩增侧向流试纸条技术十足目虹彩病毒Ⅰrecombinase polymerase amplificationlateral flow dipstickdecapod iridescent virus 1
分类号
S855.3
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1008-0589.202311011
发布时间
2024-08-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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