鸽源肺炎克雷伯菌的分离鉴定及其毒力和耐药性分析
Isolation and identification of Klebsiella pneumoniae from pigeons and analysis of virulence and drug resistance
摘要为探究喀什某鸽场致种鸽腹泻和雏鸽死亡的病原,本研究于2023年2~3月采集71份腹泻种鸽粪便和43份死亡雏鸽肝、肾、脾和肠样品,进行细菌的分离培养,采用16S rRNA和ITS(16SrDNA-23SrDNA内部转录间隔序列)对分离菌进行PCR扩增及测序,采用PCR鉴定分离菌的毒力基因;经K-B纸片扩散法检测分离菌的药物敏感性,并采用PCR检测其耐药基因;通过肠杆菌科基因间重复序列-聚合酶链式反应(ERIC-PCR)分析菌株间的亲缘关系及多位点序列分型(MLST)分析分离菌的ST型.利用小鼠致病性试验检测分离菌的致病性.结果显示:经分离培养和PCR鉴定114份样品中共分离到83株肺炎克雷伯菌(Kp)(72.8%,83/114);毒力基因uge、mrkD、rmpA、wabG、ureA和magA的检出率在85.5%~98.8%,fimH的检出率为1.2%;83株Kp对阿莫西林、氨苄西林、头孢噻肟和头孢他啶耐药的菌株占73.0%~100%,对头孢曲松、阿米卡星、左氧氟沙星、四环素、链霉素、阿奇霉素、氟苯尼考、多黏菌素B和庆大霉素耐药的菌株占1.2%~25.0%,其中4株为多重耐药Kp;耐药基因 blaSHV-11(72.3%,60/83)和 blaCTX-M-1G(43.4%,36/83)的携带率较高,而blaCTX-M-9G(14.5%,12/83)和tet(A)(6.0%,5/83)的携带率较低,但未检出耐药基因blaTEM、blaCTX-M-2G、aac、aadA1、strA、strB、tet(E)、tet(G)和 mph(A),耐药基因和耐药表型间基本呈正相关.ERIC-PCR和MLST分析显示,种鸽和雏鸽Kp分离株亲缘关系较近,且以ST23型为主.致病性试验结果显示,鸽源Kp对小鼠的LD50为3.6×103 cfu/mL.本研究首次在腹泻种鸽和死亡雏鸽体内分离到Kp,其致病性较强,携带丰富的毒力基因,且对β-内酰胺类药物耐药严重,该结果为肉鸽养殖合理用药及Kp感染的有效控制提供了参考依据.
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