摘要为了鉴定猪伪狂犬病病毒(PRV)流行株及其携带毒力基因的变异情况,本研究采集1份天津地区某猪场免疫过Bartha-K61疫苗但患严重神经症状的仔猪脑组织样品,采用荧光定量PCR(qPCR)检测PRV gE基因,并将检测为PRV的阳性样品接种PK-15细胞分离培养,并传3代后采用Reed-Muench法测定分离病毒的TCID50,采用qPCR和间接免疫荧光试验(IFA)进一步鉴定分离病毒.结果显示,经qPCR检测仔猪脑组织样品出现扩增曲线,阳性样品分离培养后测得病毒滴度为10757 TCID50/mL,分离病毒的qPCR结果出现扩增曲线,且其感染的细胞出现绿色荧光.表明分离到一株PRV,命名为TJbd2023株.采用PCR分别扩增TJbd2023株主要相关毒力基因gB、gC、gD、gE、gG、gI和TK,采用MegAlign软件分析分离病毒与GenBank登录的PRV参考株上述各毒力相关基因序列的同源性,通过Neighbor-Joining(NJ)法构建上述各毒力相关基因的进化树,采用MegAlign软件分析各毒力基因编码氨基酸主要位点的变异情况.结果显示,分别扩增到TJbd2023株的各相应毒力基因;各毒力基因的同源性分析结果显示,TJbd2023株与国内2012年后流行变异株的相似性高达98.4％～100.0％,与疫苗株(Bartha-K61)的相似性为89.6％～93.2％.进化树结果显示,这7个毒力基因均与国内GD0304株(MH582511)、BJYT株(KC981239)和DL1408株(KU360259)等PRV变异株位于同一分支,与疫苗株(Bartha-K61)未在同一分支.gB、gC、gE氨基酸序列除出现PRV变异株相同的突变位点外,gB还出现R223H和E836K的突变、gD出现R320S和gE出现T242A的突变.将TJbd2023株分别以5个剂量(10257 TCID50/mL～10657 TCID50/mL)感染6周龄KM小鼠,通过小鼠的临床症状、死亡率、死亡小鼠各组织的病理变化评估该病毒的致病性.结果显示,在5d的观察期内,感染组小鼠陆续出现奇痒及神经症状,各实验组小鼠的死亡率分别为60％、80％、100％及100％,对照组小鼠均健活.死亡小鼠各组织病变观察可见肺组织浸润性出血、肝组织血管充血及淋巴细胞增多、脑胶质细胞增多及血管周围炎性细胞聚集形成血管套等病变,对照组小鼠各组织均无明显病变.上述结果表明,本研究在天津地区分离到一株PRV变异株,其毒力因子发生了独特的氨基酸位点突变,对小鼠的致病性较强,该结果丰富了 PRV的致病性及其毒力因子变异的特征,为PR的综合防控提供参考.