2017年~2023年河南省猪圆环病毒2型的流行调查及遗传变异分析
Epidemiological investigation and genetic variation analysis of porcine circovirus type 2 in Henan Province from 2017 to 2023
摘要为了解河南省猪圆环病毒2型(PCV2)的流行及变异情况,本研究采集该地区规模化猪场2017年1月~2023年6月939份表现为繁殖障碍和呼吸道症状的病猪血液或组织样品,采用PCR方法进行PCV2检测.结果显示,PCV2总阳性率为31.42%(295/939);2017年~2022年PCV2阳性率逐年降低,分别为58.65%(61/104)、49.48%(48/97)、28.57%(36/126)、16.15%(31/192)、11.52%(19/165)和 7.87%(7/89),而 2023 年迅速上升,达到56.02%(93/166).利用PCR扩增29份PCV2阳性样品的全基因组序列并测序,采用MegAlign分析PCV2流行株全基因组序列与GenBank中4株PCV2参考株全基因组序列的同源性;采用MEGA 11软件利用NJ法构建PCV2流行株ORF2基因与GenBank中24株PCV2参考株ORF2基因的系统发育树;采用MegAlign分析PCV2流行株Cap蛋白氨基酸序列的变异特征;采用RDP4和SimPlot分析PCV2流行株全基因组的重组特征.全基因组同源性分析结果显示,本研究鉴定的PCV2全基因组序列之间的同源性为95.1%~100%,与PCV2参考株的同源性为93.7%~98.6%,其中与疫苗株 PCV2a LG(HM038034)、PCV2b DBN-SX07-2(HM641752)和 PCV2d SH(AY686763)的同源性分别为 94.8%~96.2%、95.3%~98.6%和 96.6%~97.8%,与来自丹麦的代表株 PCV2c DK1980PMWSfree株(EU148503)的同源性为93.7%~95.1%.此外,两株2023年的PCV2流行株HN230522和HN231217与参考株的同源性仅为94.5%~97.9%.进化树结果显示,有19株PCV2流行株与PCV2d基因型参考株聚为一个分支,10株与PCV2b基因型参考株聚为一个分支.其中今年出现的PCV2流行株HN230522和HN231217株虽然属于PCV2d基因型,但处于一个相对独立的分支.Cap蛋白氨基酸序列分析结果显示,与疫苗株PCV2a LG(HM038034)、PCV2b DBN-SX07-2(HM641752)和PCV2d SH株(AY686763)相比,部分 PCV2 流行株在构象表位区(aa47~aa85 和 aa165~aa200)存在 R48H、A59K/R、G85D、P151T、N178S、R180K和G197S的突变,在基因型特异性结构域(aa190~aa191/aa206/aa210)存在K206I的突变,且HN230522株在核定位信号区(NLS)(aa1~aa41)存在特有的V30L突变,HN231217株在基因型特异性结构域(aa89~aa91)存在特有的80RTV91残基.重组分析结果显示,有高达65.52%(19/29)的PCV2流行株存在疑似的重组片段,且重组片段全部位于ORF1中.上述结果表明,今年以来河南省猪场PCV2阳性率快速上升,且流行株出现了较大变异,应加强对PCV2流行动态和遗传变异的监测.本研究为河南省PCV2分子流行病学、疫苗研究提供了参考依据.
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