摘要为确定新疆石河子地区3个牛场致奶牛呼吸道疾病的病原菌,并分析其生物学特性.本研究采集6份发病牛鼻拭子样品,处理后分别接种于M-H固体培养基、哥伦比亚绵羊血平板,培养后分别观察菌落的形态.挑绵羊血平板上的单菌落培养后分别经革兰氏染色与瑞氏染色并镜检.采用PCR分别扩增细菌16S rRNA基因及溶血曼氏杆菌(Mh)特异性基因LktF.采用细菌微量生化鉴定管鉴定分离菌的生化特征.通过PCR检测分离菌荚膜抗原的血清学分型.结果显示,6份样品在M-H平板上均长出白色、光滑的圆形菌落;有4份样品均在绵羊血平板上出现轻微β溶血现象.革兰氏染色后的分离菌为紫色短杆状阴性杆菌,两端钝圆,个别呈球杆状;瑞氏染色后的分离菌为两端浓染并着色的球杆状.PCR结果显示,6株菌均在1460 bp(16S rRNA基因)出现目的条带,测序结果显示,6株菌中有4株为Mh,且该4株菌均在207 bp(LktF基因)出现目的条带.4株菌的生化鉴定结果均符合Mh的生化特征.血清学分型结果显示,4株分离菌均为荚膜A2血清型Mh(Mh-1～Mh-4).因此选择其中的Mh-1用于后续试验.通过K-B纸片法鉴定分离菌株对8类共19种药物的敏感性,采用PCR鉴定分离菌8类共15种耐药基因,根据药敏试验及耐药基因检测结果分析分离菌耐药表型与耐药基因之间的相关性.采用PCR检测分离菌及携带的6种毒力基因.药敏试验结果显示,分离菌株对大环内酯类的克拉霉素、罗红霉素,林可霉素类的林可霉素、克林霉素均耐药性较强,但对大多数药物敏感.耐药基因的PCR结果显示:分离菌携带大环内酯类耐药基因mph(E)与msr(E)、林可酰胺类耐药基因erm(42)、氨基糖苷类耐药基因strA,这与耐药表型结果基本相符.毒力基因的PCR结果显示,扩增到4种毒力基因即白细胞毒素基因LktC、唾液酸激酶相关基因gcp、蛋白相关基因gs60及外膜蛋白相关基因plpD,其余两种毒力基因均未扩增到.将Mh均以3.3×108 cfu/mL(300μL)分别感染小鼠,实验组小鼠在感染24 h内全部死亡,死亡小鼠肝脏明显肿大,且从死亡小鼠肝脏中再次分离到Mh.上述结果表明新疆石河子地区部分牛场奶牛呼吸道疾病的病死牛为牛源荚膜血清A2型Mh感染,且分离的Mh对小鼠的致病性均较强.在国内有关荚膜A2血清型Mh感染奶牛引发疾病的病例较少,本研究为该地区Mh引发牛呼吸道综合征(BRDC)的临床用药提供一定的参考依据,同时也丰富了国内有关荚膜血清A2型Mh的生物学特性.