摘要为建立一种便捷、新型、可视化,并能够用于现地检测鸭疫里默氏杆菌(RA)的方法,本研究经PCR扩增RA ompA基因并克隆至pMD19-T载体中,构建重组质粒pMD19-T-ompA,经PCR和测序鉴定正确后作为重组质粒标准品.按照TwistAmp?nfo试剂盒说明书并采用TwistAmp? nfo原理和横向流动试纸条(LFD)要求,根据RA ompA基因的保守区设计一对引物和一条探针.以pMD19-T-ompA质粒为模板,采用TwistAmp?扩增试剂盒推荐的反应体系和条件经重组酶聚合酶扩增后,将LFD插入扩增产物中,于5 min之内观察结果,并利用单一变量法优化反应条件.结果显示,该方法在37 ℃反应15 min即可完成扩增,并且可以通过LFD可视化.表明初步建立了检测RA的重组酶聚合酶扩增横向流动试纸条(RPA-LFD)方法.以RA、E.coli、鸭源沙门菌(SE)、鸭源多杀性巴氏杆菌(Pm)、葡萄球菌(Staphylococcus)、鹅细小病毒(GPV)、鸭瘟病毒(DPV)、番鸭细小病毒(MDPV)的DNA作为模板,利用本实验建立的RPA-LFD方法检测,结果显示,除RA和质粒标准品pMD19-T-ompA在检测线出现红色条带为阳性结果外,其他病原均仅在质控线出现蓝色条带,未在检测线出现条带,均为阴性结果,表明该方法的特异性较强;以1.83×107拷贝/μL～1.83×100拷贝/μL的质粒标准品为模板,利用该RPA-LFD方法检测,结果显示该方法的检测限为1.83×101拷贝/μL,是环介导等温扩增横向流动试纸条(LAMP-LFD)方法检测限的1/10,比常规PCR方法高100倍,敏感性较高.利用建立的RPA-LFD方法和常规PCR方法检测64份临床鸭病料样品,结果显示2种方法对RA的检出率均为10.93％(7/64),二者的阳性符合率与总符合率均达100％.本实验建立的RPA-LFD方法特异性强、敏感性高、快速、准确,不需要昂贵仪器及专业人员,并能通过LFD使结果可视化,可适用于基层对RA的检测,为RA临床样品的检测和流行病学调查提供了一种新的技术手段.