换一批
换一批大肠杆菌裂解性噬菌体内溶素的表达与活性研究
Expression and activity of endolysin from Escherichia coli lytic bacteriophages
摘要为制备大肠杆菌裂解性噬菌体内溶素(Endolysin)并分析其抑菌活性,本研究利用PCR扩增endolysin基因,克隆至低温表达载体pCold GST、转化Rosetta(DE3)感受态细胞构建重组表达菌株pCold-endolysin/Rosetta(DE3),酶切及测序鉴定结果显示与预期一致,插入序列正确.将该重组菌经终浓度0.2 mmol/L IPTG诱导2h表达重组endolysin蛋白(r-endolysin),采用GST蛋白纯化试剂盒纯化目的蛋白、经SDS-PAGE和western blot检测,采用Bradford法测定r-endolysin浓度.经滴板计数后采用活菌稀释计数法测定r-endolysin蛋白对大肠杆菌的体外裂解活性.SDS-PAGE和westernblot检测结果显示,r-endolysin分子量约35 ku,且主要以可溶性形式表达,经纯化后获得35 ku单一目的条带,蛋白浓度经测定为0.54 mg/mL.体外抑菌活性试验结果显示,与其他组相比,EDTA+r-endolysin组的抑菌效果极显著增强(P＜0.0001),且呈时间依赖性,EDTA+PBS组的抑菌效果优于r-endolysin+PBS组.本研究所制备的r-endolysin蛋白抑菌活性较好,这为进一步开发致病性大肠杆菌的新型抑菌制剂奠定了扎实基础.
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关键词
大肠杆菌噬菌体内溶素原核表达抑菌活性Escherichia colibacteriophagesendolysinprokaryotic expressionbacteriostatic activity
分类号
S852.61
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1008-0589.202403014
发布时间
2025-02-25
基金项目
国家级大学生创新创业训练计划项目（cxcy2022015）；
国家级大学生创新创业训练计划项目（cxcy2022001）；
湖南省教育厅科学研究项目（21A0442）；
衡阳市科技创新项目（202250045230）；
中央引导地方科技发展资金项目（2022ZYC091）；
湖南省普通高等学校教学改革研究项目（HNJG-20230871）
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