摘要为了探究覆盆子多糖(RFP)对骨髓来源树突状细胞(BMDC)的免疫调节作用及相关作用机制,本研究将不同浓度(10 μg/mL～100 μg/mL,后同)的RFP分别作用BMDC 24 h后收集细胞,采用流式细胞术检测RFP对BMDC吞噬活性、MHC I、MHC II以及共刺激分子表达水平的影响.结果显示:与阴性对照组(NC)相比,10 μg/mL～100 μg/mL RFP可极显著抑制BMDC的吞噬活性(P<0.01),其中以50 μg/mL RFP抑制BMDC的吞噬活性作用最强,且各浓度的RFP均可极显著促进共刺激分子(CD40、CD80、CD86)及MHC I、MHC II的表达(P<0.01).采用RT-qPCR检测100 μg/mL RFP作用BMDC后不同时间细胞中炎症相关因子TNF-α、IL-β、IL-6、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、环加氧酶2(PTGS2)、Toll样受体2(TLR2)mRNA的转录水平.采用ELISA及Griess法检测不同浓度RFP作用BMDC后细胞上清中IL-1β、IL-6、TNF-α、趋化因子CC配体5(CCL5)、趋化因子CXC配体2(CXCL2)及NO的含量.RT-qPCR结果显示:与NC组相比,RFP作用1h～4h时,BMDC中TNF-α、IL-1β、IL-6、PTGS2、CXCL2及TLR2 mRNA的转录水平均显著(P<0.05)和极显著升高(P<0.01),且呈先上升后下降的趋势,在作用2h时达到峰值;iNOS mRNA的转录水平则在RFP作用4h时极显著升高(P<0.01).ELISA结果显示:与NC组相比,25 μg/mL～100 μg/mL RFP作用后的BMDC中IL-1β、IL-6、TNF-α、CCL5、CXCL2的分泌水平均极显著升高(P<0.01),且呈剂量依赖性;而低浓度RFP(10 μg/mL)作用的BMDC中仅IL-1β、IL-6、CXCL2的分泌水平极显著升高(P<0.01);各浓度RFP作用的BMDC上清中NO的含量均极显著升高(P<0.01).分别以RFP处理BMDC 30 min,采用western blot检测p38、JNK、ERK及IKK-β和p65及其磷酸化蛋白的表达水平;采用特异性通路抑制剂(包括JNK、ERK、p38及NF-κB通路的抑制剂)分别与RFP共处理BMDC 24 h,采用ELISA检测细胞上清中TNF-α的含量.Western blot结果显示,与NC组相比,各浓度RFP作用的BMDC中MAPK信号通路关键蛋白p38、JNK和ERK以及NF-κB信号通路关键蛋白IKK和p65蛋白的磷酸化表达水平均显著和极显著升高(P<0.05、P<0.01);ELISA结果显示,与NC组相比,RFP作用的BMDC中TNF-α的分泌水平均极显著升高(P<0.01),各信号通路抑制剂与RFP共处理的BMDC中TNF-α的分泌水平均显著和极显著下降(P<0.05、P<0.01).将鼠源TLR2抗体预处理BMDC 2 h后与RFP共作用BMDC 4 h,采用ELISA检测细胞上清中TNF-α的含量,结果显示:与NC组相比,RFP及LPS(阳性对照)作用的BMDC中TNF-α的分泌水平均极显著升高(P<0.01);但经TLR2抗体处理后上述细胞中TNF-α的分泌水平均极显著下降(P<0.01).上述结果首次表明RFP能够显著抑制BMDC的吞噬活性,诱导其分化与成熟,促进BMDC的炎症反应和免疫应答,且上述作用依赖于TLR2介导的MAPK和NF-κB信号通路.本研究为进一步开发RFP作为新型疫苗免疫增强剂和佐剂提供参考依据.