换一批猪Ⅰ类白细胞抗原单克隆抗体的制备及其在非洲猪瘟病毒感染机制研究中的初步应用
Preparation of SLA Ⅰ monoclonal antibody and its preliminary application in the study of the infection mechanism of African swine fever virus
摘要猪I类白细胞抗原(SLA Ⅰ)是机体内至关重要的免疫相关蛋白,是启动特异性细胞毒性T细胞(CTL)免疫应答的核心分子.在机体内,SLA Ⅰ负责将内源性抗原肽递呈至细胞膜表面,由CD8+T细胞识别,启动机体适应性免疫应答.为了制备SLA Ⅰ的单克隆抗体(MAb),本研究将SLA Ⅰ-1*04:01等位基因胞外区序列与麦芽糖结合蛋白(MBP)序列连接,在大肠杆菌原核表达系统中表达,获得可溶性重组蛋白MBP-SLA Ⅰ.经亲和层析纯化后,采用MBP-SLA Ⅰ免疫BALB/c小鼠3次,采用ELISA检测小鼠血清抗体水平,对血清抗体效价在1:10 000以上的小鼠进一步冲击免疫后,分离小鼠脾脏B淋巴细胞,与SP2/0骨髓瘤细胞融合.采用ELISA方法筛选阳性的杂交瘤细胞进行3次克隆纯化,最终筛选得到稳定分泌SLA Ⅰ抗体的杂交瘤细胞株MAb-1A11.经ELISA检测纯化后的MAb-1A11效价可达1:3 200,经小鼠MAb抗体亚类鉴定试剂盒鉴定其重链为IgG2b,轻链为κ.采用western blot检测该抗体的特异性,结果显示,MAb-1A11能够识别猪肺泡巨噬细胞(PAM)表达的内源性SLA Ⅰ,在42 ku处出特异性条带,而对HEK293T细胞中表达的同源物人白细胞抗原无交叉识别作用.利用MAb-1A11为一抗,采用western blot进一步检测非洲猪瘟病毒(ASFV)HLJ/18-6GD株感染的PAM中SLA Ⅰ的表达水平,结果显示,随着ASFV感染时间的延长,SLA Ⅰ表达水平出现轻微下降.本研究制备了SLA Ⅰ的MAb,并初步将其应用于ASFV感染机制的研究中,为深入了解SLA Ⅰ所受调控的机制提供了可靠工具.
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关键词
猪白细胞抗原I单克隆抗体western blot非洲猪瘟病毒SLAⅠmonoclonal antibody(MAb)western blotAfrican swine fever virus(ASFV)
分类号
S852.6
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1008-0589.202403023
发布时间
2025-04-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
黑龙江省自然科学基金杰出青年基金项目（JQ2023C005）
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