摘要为了筛选和鉴定对鱼源气单胞菌具有潜在拮抗作用的益生菌,并分析其安全性,本研究采集上海崇明区某草鱼养殖池塘底泥样品经细菌分离,并以5株鱼源气单胞菌为指示菌,采用点种法和牛津杯法筛选对上述指示菌有拮抗作用的菌株,结果显示,从养殖底泥样品中共获得24株细菌,通过筛选获得1株对5株气单胞菌均具有较强拮抗作用的菌株PN06.通过形态学观察、生理生化鉴定及16S rRNA基因和gyrA基因的PCR扩增、测序及序列分析鉴定菌株PN06的种属;采用牛津杯法测定菌株PN06对9株水产源病原菌的拮抗作用;利用血琼脂平板测定其溶血性;通过PCR检测其是否携带10种芽孢杆菌常见的毒力基因;采用K-B纸片法检测分离菌对7类22种抗菌药物的敏感性.结果显示,菌株PN06为革兰氏阳性短杆菌,与芽孢杆菌属的生理生化特征一致.BLAST比对结果显示,与菌株PN06 16S rRNA基因及gyrA基因同源性最高的菌株分别为贝莱斯芽孢杆菌ICR-1株和贝莱斯芽孢杆菌K0 1株,同源性分别达98.82％和100％.16SrRNA基因的进化树显示,菌株PN06与不同种属的芽孢杆菌聚为同一大分支,并未与芽孢杆菌聚为同一分支;gyrA基因的进化树显示,菌株PN06与贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)聚为同一大分支,并与贝莱斯芽孢杆菌K01株聚为同一小分支,进一步表明该菌株为贝莱斯芽孢杆菌.菌株PN06对9株常见水产病原菌的抑菌圈直径为16.00 mm～24.00 mm,抑菌效果为杀鲑气单胞菌BZ01＞嗜水气单胞菌JS02＞维氏气单胞菌WT07＞豚鼠气单胞菌CD16＞温和气单胞菌LB13＞鲇爱德华氏菌DY08＞荧光假单胞菌B01＞类志贺邻单胞菌CJ14＞腐败希瓦菌JS09.菌株PN06无溶血活性,不携带肠毒素Nhe基因(nheA、nheB和nheC)、肠毒素T基因bceT、FM基因entFM、细胞毒素K基因cytK、呕吐基因ces和溶血素BL基因(hblA、hblC和hblD)等10种毒力基因,对氟苯尼考、卡那霉素、恩诺沙星等21种抗菌药物均敏感,仅对青霉素耐药.将菌株PN06以1.5×106 cfu/mL～1.5×109 cfu/mL的剂量经腹腔注射感染草鱼,结果显示,各感染组草鱼均健活.上述结果表明,贝莱斯芽孢杆菌PN06株对气单胞菌具有较强的拮抗作用,且生物安全性高,可作为鱼源气单胞菌病防治的潜在益生菌.本研究为水产动物细菌性疾病的防治提供新思路和新的技术手段.