摘要为建立一种快速、高效、准确的溶血性曼氏杆菌(MH)抗体的检测方法,本研究采用生物信息学软件对MH外膜蛋白A(OmpA)的理化性质和亲/疏水性、跨膜结构和信号肽进行分析后,利用PCR扩增MH OmpA基因,构建重组表达质粒pET-32a-OmpA,经生物公司测序及酶切鉴定正确后转化大肠杆菌Rosetta感受态细胞,经IPTG诱导重组OmpA蛋白(rOmpA)的表达,SDS-PAGE检测结果显示,在约57ku处出现目的条带,且rOmpA主要以为包涵体形式表达.rOmpA表达产物经镍柱亲和层析法纯化后利用western blot鉴定,结果显示,在57.03 ku处出现特异性条带,表明rOmpA可与MH阳性血清产生良好的反应原性.以rOmpA作为包被抗原,采用方阵法通过对各反应条件的优化,初步建立MH抗体的间接ELISA检测方法.利用该方法检测多杀性巴氏杆菌、大肠杆菌、鼠伤寒沙门菌、MH-1、MH CVCC4091(A5型)以及MH-2(A1型)阳性血清,结果显示,除MH-1、CVCC4091以及MH-2检测为阳性外,其他细菌阳性血清均为阴性结果,特异性较强.利用该间接ELISA方法检测2倍倍比稀释的待检阳性血清(1∶8 000～1∶512 000),结果显示,阳性血清稀释至1∶512 000时仍为阳性,敏感性较高.将同一批次和不同批次纯化的rOmpA包被ELISA板,按照该ELISA方法检测5份MH阳性血清,分析该方法的重复性.结果显示,批内和批间重复性试验的变异系数均小于10％,表明该方法重复性好.采用建立的间接ELISA方法和间接血凝试验(IHA),对82份临床动物(羊、兔、鼠)血清样品检测,结果显示,间接ELISA检测方法的阳性率为47.6％,阴性率为52.4％;IHA检测方法的阳性率为45.1％,阴性率为54.9％.二者的阳性符合率为94.9％,阴性符合率为95.6％,总符合率为99.3％.另外,从鼠体内检出MH阳性率最高为75.0％,表明本研究建立的间接ELISA方法可以用于临床样品的检测.该检测方法的建立为临床MH抗体的检测提供可靠的技术手段,为MH的流行病学调查等奠定了基础.