摘要为了建立检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗体的ELISA方法,本研究以纯化的PRRSV全病毒为包被抗原,利用PRRSV N蛋白单克隆抗体(MAb)为阻断抗体,经棋盘法优化各反应条件,建立了检测PRRSV抗体的阻断ELISA(B-ELISA)方法.结果显示,B-ELISA方法的最佳抗原包被浓度为1 μg/mL,血清样品稀释度为1∶4,酶标PRRSV N蛋白MAb的最佳稀释度为1∶3 000.ELISA结果判定标准为血清样品抑制率PI≥40％时判定为阳性,PI＜40％判定为阴性.利用该方法检测PRRSV-1、PRRSV-2、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪瘟病毒(CSFV)、猪细小病毒(PPV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)等猪病毒阳性血清,结果显示该方法仅检测PRRSV-1和PRRSV-2为阳性,与其他病毒阳性血清均无交叉反应,特异性强.利用该方法和IDEXX试剂盒分别检测2倍倍比(1∶2～1∶2048)稀释的PRRSV 71#标准阳性血清,结果显示,该方法能检测出256倍稀释的71#标准阳性血清,而IDEXX试剂盒能检测到128倍稀释的71#标准阳性血清,本实验建立的方法敏感性更高;从同一批次和不同批次包被的ELISA板中各取3块,分别检测5份猪血清样品,每份样品各重复3次,进行批内和批间重复性试验,结果显示批内重复性试验的变异系数小于10％,批间重复性试验的变异系数小于15％.利用该方法和商品化IDEXX试剂盒对黑龙江地区采集的1 012份临床血清样品进行检测,结果显示,本研究建立的B-ELISA对样品的阳性检测率为73.42％(743/1 012),阴性率为26.58％(269/1 012),IDEXX试剂盒对样品的阳性检测率为71.84％(727/1012),阴性率为28.16％(285/1 012),二者的总符合率达97.43％,Kappa值为0.957,二者检测结果高度符合.本研究建立的B-ELISA方法为PRRSV的流行病学调查及其抗体水平的监测与检测提供了新的技术手段.