摘要为探究旋毛虫肌幼虫谷氨酸脱羧酶(GAD)在肌幼虫侵入肠道中发挥的作用,本研究分别将设计与合成的siRNA-GAD、siRNA-Control转染旋毛虫肌幼虫(siRNA-GAD组、siRNA-Control组、后者为阳性对照组NC)并设未转染siRNA的阳性对照组(PC组),于转染后12 h分别采用荧光定量PCR(qPCR)和western blot检测各组旋毛虫肌幼虫GAD基因的转录及其蛋白表达水平.结果显示,siRNA-GAD组相对PC组肌幼虫GAD基因的转录水平和蛋白表达水平分别降低63.7％(P＜0.001)和62％(P＜0.0001),表明siRNA-GAD能够干扰旋毛虫肌幼虫GAD基因的转录及表达.将上述各组旋毛虫肌幼虫分别感染BALB/c小鼠,并设未感染的小鼠为阴性对照,感染10d时对小鼠采样,采用ELISA检测小鼠血清中促炎细胞因子TNF-α、IFN-γ和抗炎细胞因子IL-4、IL-10的分泌水平;通过流式细胞术检测小鼠脾脏CD4+/CD8+T细胞比值;制备各组小鼠小肠组织病理切片观察其病理变化;采用qPCR检测小鼠小肠调节性T细胞(Treg细胞)活化标志物GARP、CD62L、OX40和趋化因子受体CXCR3、CCR4、CCR5、CCR10 mRNA的相对转录水平;采用免疫组化法检测各组小鼠小肠Foxp3的表达情况.结果显示,与阴性对照组相比,旋毛虫感染引起宿主血清细胞因子TNF-α、IFN-γ、IL-4和IL-10的分泌水平均显著上升(P＜0.05),相比PC组siRNA-GAD组小鼠血清中IL-4和IL-10的分泌水平分别下降7.249％和8.460％(P＜0.05);siRNA-GAD组小鼠脾脏中CD4+/CD8+T细胞比值升高34.72％,差异显著(P＜0.05);组织病理切片观察可见,PC组小鼠小肠上皮受损,局部炎性浸润,siRNA-GAD组小鼠肠绒毛水肿严重;相较PC组,siRNA-GAD组小鼠小肠Treg细胞活化标志物GARP和OX45的转录水平分别降低37.30％和13.06％(P＜0.05);Treg细胞趋化因子受体CXCR3和CCR4的转录水平分别降低77.26％和61.06％(P＜0.05);免疫组化结果显示,与阴性对照组相比,旋毛虫感染后小鼠小肠Treg细胞中的黄色颗粒增多,而siRNA-GAD组小鼠小肠Treg细胞中的黄色颗粒沉着相对较少,表明干扰GAD基因能够降低旋毛虫成虫期诱导Treg细胞标志蛋白Foxp3的表达.上述结果表明,干扰旋毛虫GAD基因能够降低小鼠小肠Treg细胞的活化水平,抑制宿主Th2型免疫反应,提高宿主非特异性免疫反应水平,也表明GAD参与旋毛虫诱导的宿主免疫反应,本研究为探究旋毛虫的致病机制及旋毛虫病的防治提供新思路.