摘要为制备猪伪狂犬病病毒(PRV)gE糖蛋白的单克隆抗体(MAb),本研究将PRV JM株gE蛋白主要抗原表位区域(aa52～aa238)的基因序列经密码子优化后由公司合成后克隆于pET-32a载体中构建重组表达质粒pET-32a-gE,经原核表达及纯化获得重组gE蛋白(rgE),采用SDS-PAGE鉴定rgE的表达及纯化效果,并经BCA法测定rgE的浓度.将其免疫BALB/c小鼠.取3次免疫小鼠的脾脏制备脾细胞,与小鼠骨髓瘤细胞(SP2/0)融合.通过ELISA筛选杂交瘤细胞株,经western blot和间接免疫荧光试验(IFA)鉴定MAb的反应性,利用MAb亚类鉴定试剂盒检测其重链和轻链类型.以截短的gE合成多肽作为抗原,采用间接ELISA方法鉴定MAb识别的抗原表位,并利用MAb通过western blot和IFA鉴定PRV野毒株JM及gE基因缺失株PRV JMΔgE/TK中gE蛋白的表达水平.结果显示,经间接ELISA方法筛选到1株稳定分泌gE蛋白的单克隆细胞株,命名为4C6B.Western blot和IFA均表明本研究筛选的MAb能够特异性识别PRV感染PK-15细胞中表达的gE蛋白;亚类鉴定结果显示MAb重链为IgM型,轻链为κ链.间接ELISA结果显示MAb能够识别gE蛋白中的一个线性B细胞表位131ACHPDLVLGRACVPEAPEMG150.利用制备的MAb腹水进行PRV野毒和gE基因缺失株的鉴定,结果显示该MAb能够有效鉴别PRV JM野毒株与gE缺失株.本研究制备的PRV gE蛋白的4C6B MAb可以用于特异性鉴别PRV JM野毒株和gE基因缺失株,同时也可以为PRV检测方法的建立、PRV基因缺失疫苗的构建以及gE蛋白的生物学功能研究提供生物材料.