摘要为研究三叶青多糖(THP)作为佐剂对巴氏杆菌(Pm)灭活疫苗诱导小鼠免疫应答的影响,本研究将96只ICR雌性小鼠随机均分为4组:空白组(BC组)、Pm灭活疫苗组(Pm),含铝胶佐剂Pm疫苗组(Alum-Pm)、含THP佐剂的Pm疫苗组(THP-Pm),分别免疫相应疫苗两次,每次间隔两周.采用ELISA方法分别检测小鼠二免后7 d、14 d、21 d、28 d、35 d和42d时血清IgG抗体水平,以及二免后28d血清IgG1、IgG2a抗体亚类水平,以及Th1型(INF-γ)、Th2型(IL-4、IL-5)和Th17型(IL-17)细胞因子水平.结果显示,与Alum-Pm组相比,THP-Pm组小鼠血清中IgG抗体水平在二免后14d和28d显著升高(P<0.05),于28d达到峰值,且THP-Pm组小鼠血清中IgG1和IgG2a抗体亚类水平显著高于其它各组(P<0.05).与BC组相比,THP-Pm组小鼠血清IFN-γ和IL-17细胞因子分泌水平显著升高(P<0.05),IL-4和IL-5极显著升高(P<0.01、P<0.001);与Pm组相比,THP-Pm组小鼠血清IFN-γ和IL-5细胞因子的分泌水平显著升高(P<0.05),细胞因子IL-4的分泌水平极显著升高(P<0.01);与Alum-Pm组相比,仅IL-4的分泌水平显著升高(P<0.05).二免后28d取各组小鼠脾脏,制备脾淋巴细胞悬液,采用CCK-8法检测各组小鼠淋巴细胞增殖水平,采用荧光定量PCR(qPCR)检测淋巴细胞中T-bet和GATA-3基因的相对转录水平,采用流式细胞术检测淋巴细胞中CD4+与CD8+T淋巴细胞亚群的比值.CCK-8法检测结果显示,分别经灭活的Pm和LPS刺激后,THP-Pm组小鼠淋巴细胞的增殖水平极显著高于其余各组(P<0.01、P<0.001、P<0.0001),经ConA刺激后THP-Pm组小鼠淋巴细胞的增殖水平极显著高于BC组和Pm组(P<0.01).qPCR检测结果显示,经Pm刺激后,THP-Pm组小鼠淋巴细胞T-bet mRNA的相对转录水平极显著高于BC组(P<0.0001)和Pm组(P<0.001),显著高于Alum-Pm组(P<0.01);THP-Pm组小鼠淋巴细胞GATA-3 mRNA的相对转录水平极显著高于BC组(P<0.001),显著高于Pm组和Alum-Pm组(P<0.05).流式细胞术检测结果显示,与Pm组相比,THP-Pm组小鼠淋巴细胞CD4+/CD8+T淋巴细胞的比值显著升高(P<0.05).二免后49d通过攻毒试验检测免疫不同佐剂的Pm疫苗对小鼠的保护作用,结果显示,攻毒后10d内BC组、Pm组、Alum-Pm组、THP-Pm组小鼠的存活率分别为0、33.3%、66.7%、83.3%,其中THP-Pm组小鼠的存活率极显著高于BC组和Pm组(P<0.01).本研究首次证实THP佐剂可显著增强Pm灭活疫苗的免疫保护效果,为THP作为新型疫苗佐剂的开发与应用提供了重要参考依据.