摘要为鉴定广西罗非鱼养殖场疑似感染罗湖病毒(TiLV)死亡罗非鱼的病原,并评估中草药对该致病原的抑制作用,本实验取患病死亡罗非鱼心、脑、肝脏、脾脏和肾脏等脏器混匀研磨后,采用套式PCR扩增TiLV S3基因并测序,经BLAST分析与病毒S3基因同源性较高的病毒,利用MEGA 6.0软件构建上述病毒S3基因的遗传进化树.套式PCR结果显示,在250 bp处出现目的条带,BLAST比对与进化树分析发现鉴定病毒与GenBank中TiLV GD1710株(NC 029927.1)相应基因的同源性高达99.9%,与该病毒的S3基因处于同一进化分支.将死亡罗非鱼脏器组织混合物的上清液接种鲤鱼上皮瘤细胞(EPC)3 d后观察到明显的细胞病变(CPE),收集细胞培养物经套式PCR鉴定结果与上述套式PCR结果一致.表明分离到罗非鱼源TiLV.制备24种中草药水提物(麻黄、紫草、牛大力、地耳草、杜仲、枸杞子、五味子、黄芩、大黄、甘草、毛冬青、黄芪、决明子、车前草、麦冬、菟丝子、狗肝菜、连翘、雷公根、鱼腥草、丁香、蒲公英、益母草、雷公藤)与EPC孵育24h后接种TiLV 3 d,采用CCK-8法检测各组细胞的细胞活力,结果显示,与TiLV感染组相比,麦冬、菟丝子水提物能够显著提高TiLV感染EPC的相对活力(P<0.05),五味子、甘草、车前草、狗肝菜水提物能够提高TiLV感染EPC的相对活力,初步筛选到这6种中草药水提物对TiLV具有抑制作用.将不同浓度的这6种中草药水提物按上述方法与TiLV处理EPC 3 d,采用CCK-8法检测各组细胞的相对活力,结果显示,与TiLV感染组相比,1 mg/mL的甘草和麦冬、5 mg/mL的麦冬、菟丝子和狗肝菜、25 mg/mL的狗肝菜和菟丝子均能显著提高TiLV感染EPC的相对活力(P<0.05).上述结果表明麦冬、狗肝菜和菟丝子水提物均具有良好的抗病毒效果,且抗病毒效果与其剂量呈正相关.本研究明确了导致此次疫情的病原为TiLV,并为中草药在罗非鱼罗湖病毒病防治中的应用提供了科学依据.