换一批MultiSite Gateway技术在疟原虫条件性基因打靶载体快速构建中的应用
Application of MultiSite Gateway Technology in High Efficient Construction of Plasmodium Gene-targeting Vector
摘要目的 构建可条件性敲除约氏疟原虫ebl基因的打靶载体.方法 以约氏疟原虫基因组DNA为模板,PCR扩增EBL-3U和EBL-5U1、EBL-5U2+EBL.orf同源臂片段,利用MuhiSite Gateway技术,完成若干DNA片段的定性重组,构建打靶载体pCHD-EBL-RFT,并对质粒酶切和测序鉴定.PCR扩增约氏疟原虫UIS4-5U片段,置换质粒PbUIS4/flp中原有同源臂,并通过位点特异突变技术,获取Avrll和Nhel两种线性化位点,构建插入载体PyU IS4/flp.结果 构建出打靶载体pCHD-EBL-FRT和PyUIS4/flp,酶切鉴定和测序分析正确.结论 将MultiSite Gateway技术成功地用于疟原虫条件打靶载体的构建,建立了以MultiSite Gateway技术为基础的打靶载体构建体系.
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分类号
R382.3（医学寄生虫学）
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.0258-4646.2012.12.004
发布时间
2013-02-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金（30972572）
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