换一批
换一批摘要目的 研究转录因子RUNX2对IPO8基因启动子的调控作用.方法 基于PCR技术,分别突变和剔除IPO8基因启动子片段P-732/+ 134上RUNX2结合位点(-497～-502 bp),改造后的启动子片段定向插入荧光素酶表达载体PGL-3 Basic.重组质粒分别转染Saos-2与HeLa细胞,检测报告基因荧光素酶活性.应用染色质免疫共沉淀(ChIP)证实RUNX2与IPO8启动子在Saos-2细胞内结合.慢病毒介导RUNX2在Saos-2细胞的靶向沉默,定量PCR检测相应组别中IPO8 mRNA的表达.结果 成功突变和剔除IPO8启动子上RUNX2结合位点,破坏RUNX2结合位点导致IPO8启动子活性在Saos-2细胞中显著下降(P＜0.05) 转录因子RUNX2在Saos-2细胞与IPO8启动子有效结合,下调RUNX2的表达导致IPO8转录水平下降(P＜0.05).结论 转录因子RUNX2正性调控IPO8基因的转录.
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