结直肠癌外泌体诱导肿瘤相关巨噬细胞极化抑制CD8+T细胞抗肿瘤活性
Colorectal cancer exosomes induce tumor associated macrophage polarization to inhibit the anti-tumor activity of CD8+T cells
摘要目的 探讨结直肠癌外泌体诱导巨噬细胞极化对CD8+T细胞抗肿瘤活性的影响.方法 M0型巨噬细胞与PBS及HT-29和LoVo细胞外泌体(HT-29 exo和LoVo exo)共孵育48 h(PBS组、HT-29 exo组、LoVo exo组),实时定量PCR检测细胞中M2型巨噬细胞标志物CD206、Arginase-1、IL-10、CD163以及M1型巨噬细胞标志物iNOS和IL-1β mRNA表达量.CD8+T细胞与PBS组、HT-29 exo组和LoVo exo组M0巨噬细胞共孵育48 h(PBS+M0组、HT-29 exo+M0组和LoVo exo+M0组),流式细胞术检测CD8+T细胞中PD-1的表达.将PBS+M0组、HT-29 exo+M0组和LoVo exo+M0组CD8+T细胞分别与HT-29及LoVo细胞共孵育24 h(PBS+M0/CD8+T组,HT-29 exo+M0/CD8+T组和LoVo exo+M0/CD8+T组),ELISA检测细胞上清γ干扰素(IFN-γ)、穿孔素(perforin)和颗粒酶B(granzyme B)浓度,细胞毒性实验检测HT-29和LoVo细胞裂解率.结果 与PBS组相比,HT-29 exo组、LoVo exo组细胞中CD206、Arginase-1、IL-10、CD163 mRNA表达显著上调(P<0.05),iNOS和IL-1β mRNA表达显著下调(P<0.05).与PBS+M0组相比,HT-29 exo+M0组和LoVo exo+M0组CD8+T细胞PD-1 表达上调(P<0.001).与 PBS+M0/CD8+T组相比,HT-29 exo+M0/CD8+T组和LoVo exo+M0/CD8+T组细胞培养上清中IFN-γ、perforin、granzyme B浓度以及HT-29和LoVo细胞裂解率均显著降低(P<0.001).结论 HT-29 exo和LoVo exo诱导的M2型巨噬细胞可抑制CD8+T细胞抗肿瘤活性.
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