换一批钙调蛋白突变体D130V与心肌Cav1.2通道IQ基序的相互作用
Interaction between calmodulin mutant D130V and IQ motif of cardiac Cav1.2 channel
摘要目的 探讨钙调蛋白(CaM)突变体D130V与心肌Cav1.2通道IQ基序的结合作用.方法 采用折叠识别建模、同源建模和蛋白对接方法预测突变体CaM-D130V与IQ基序的结合;利用42 ℃精确热击法将质粒转化至大肠杆菌BL-21感受态细胞中,诱导GST融合蛋白表达;超声破碎法提取蛋白,GS-4B beads纯化、PreScission蛋白酶切除GST标签;利用SDS-PAGE检测蛋白纯度;GST pull-down实验检测CaM-D 130V与IQ基序的相互作用.结果 蛋白对接结果表明,CaM-WT、CaM-D 130V与心肌Cav 1.2通道IQ基序均具有结合作用,但与CaM-WT相比,突变体CaM-D 130V与IQ基序的结合位点减少,且结合构象发生变化,结合能减小(|S|由48.086 6 kcal/mol下降至47.309 5 kcal/mol).GST pull-down实验结果显示,在2 mmol/L Ca2+浓度下,与CaM-WT相比,CaM-D 130V与IQ基序的结合量显著减少(P＜0.01),亲和力显著降低.结论 CaM-D 130V与心肌Cav1.2通道IQ基序的结合能力降低,可能导致Cav1.2通道功能改变,为探讨CaM突变体相关的心血管疾病的发病机制和靶向治疗提供理论依据.
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关键词
钙调蛋白突变体心肌Cav1.2通道结合能力长QT综合征calmodulinmutantcardiac Cav1.2 channelbinding abilitylong QT syndrome
分类号
R96（药理学）
栏目名称
DOI
10.12007/j.issn.0258-4646.2025.04.004
发布时间
2025-05-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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