FTO介导XBP1 mRNA m6A去甲基化修饰促进肝细胞癌Hep G2细胞迁移及侵袭
FTO-mediated m6A demethylation of XBP1 mRNA promotes migration and invasion of Hep G2 hepatocellular carcinoma cells
摘要目的 探讨脂肪量和肥胖相关蛋白(FTO)介导X-框结合蛋白1(XBP1)mRNA N6甲基腺苷(m6A)去甲基化修饰对肝细胞癌细胞迁移及侵袭的影响.方法 以人肝细胞癌细胞系Hep G2为研究对象,将FTO过表达(oe-FTO)及其阴性对照(Vector)质粒和XBP1 siRNA干扰质粒(si-XBP1)及其阴性对照(si-NC)质粒转染至Hep G2细胞中,再采用FTO去甲基化酶抑制剂FB23-2干预细胞.用CCK-8法检测细胞增殖活性;Transwell实验检测细胞侵袭及迁移能力;甲基化RNA免疫共沉淀法检测细胞中XBP1 mRNA m6A甲基化水平;实时定量PCR检测细胞中XBP1和FTO mRNA表达水平;Western blotting检测细胞中XBP1和FTO蛋白表达水平;放线菌素D实验检测细胞XBP1 mRNA半衰期.结果 过表达FTO可促进Hep G2细胞增殖活性及侵袭和迁移能力,同时降低细胞中XBP1 mRNA m6A甲基化水平,提高细胞中XBP1 mRNA和蛋白表达水平,延长XBP1 mRNA半衰期(P均<0.05);然而,沉默XBP1或FB23-2干预均可逆转FTO对Hep G2细胞迁移和侵袭的促进作用.结论 过表达FTO通过介导XBP1 mRNA m6A去甲基化修饰,增强XBP1 mRNA稳定性,促进肝细胞癌细胞迁移及侵袭.
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