换一批不同的毒簟碱配体对在sr9昆虫细胞内表达的M2AChR-Gilα融合蛋白的作用
Effects of various muscarinic ligands on M2AChR-Gi1α fusion proteinexpressed in Sf9 insect cells
摘要目的:表达M2AChR-Gilα融合蛋白,检测不同配体或镁离子对M2AChR与Gilα间相互作用的影响.方法:两步PCR建立M2AChR-Gilα融合DNA,并在Sf9细胞内表达.[3H]QNB和[3sS]GTPγs结合实验检测M2AChR-Gilα融合蛋白功能.结果:M2AChR-Gilα的表达水平为(20.12±0.14)nmol@g-1protein.不同配体的存在使融合蛋白中Gilα与GDP的亲和力发生变化.乙酰胆碱,卡巴胆碱,McN-A-343,毛果芸香碱和阿托品存在以及无配体存在时,GDP的IC50值(95%可信区间)分别是178(148-214)μmoL/L,158(126-199)μmol/L,66(56-78)μmol/L,62(55-72)μmol/L,5.0(4.6-5.5)μmol/L和15.9(14.3-17.6)μmol/L.在卡巴胆碱的作用下,Gilα随Mg2+浓度增加而减小对GDP的亲和力,而阿托品使Gilα不受Mg2+浓度的影响,始终保持对GDP的高亲和性.结论:杆状病毒-Sf9细胞系统表达的M2AChR-Gilα具备M受体配体结合特性和组分间的偶联功能.M2AChR-Gilα对GDP的亲和性决定于M2受体配体的性质,分析GDP亲和力的大小有利于筛选和鉴别M2亚型特异性药物.Mg2+离子是M2AChR-Gilα与低亲和性GDP结合必需的阳离子.
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关键词
毒蕈碱受体抑制的GiG蛋白重组融合蛋白质类毒蕈碱激动剂毒蕈碱拮抗剂腺苷三磷酸鸟苷三磷酸鸟苷二磷酸放射配位体测定muscarinic receptorsinhibitory GiG-proteinrecombinant fusion proteinsmuscarinicagonistsmuscarinic antagonistsadenosine triphosphateguanosine triphosphateguanosine diphosphateradio-ligand assay
分类号
R96（药理学）
栏目名称
发布时间
2007-07-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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