换一批
换一批摘要目的：探索一种简便可靠、清晰的免疫组化双重标记方法,可用普通光学显微镜观察,并能长期保存染色结果。方法免疫组化双标中,均使用辣根过氧化物酶( HRP)连接的二抗,底物分别选用二氨基联苯胺(3,3′-diaminobenzidine, DAB)和镍增强DAB。第一标DAB染色完成后切片煮沸4~5 min以灭活HRP,完全阻断交叉反应,然后进行第二标镍增强DAB染色。结果①切片煮沸5 min,可完全灭活残余的HRP酶活性,防止染色反应交叉；5%的H2 O2灭活HRP酶不完全,易产生交叉反应；短暂高温灭活HRP不损坏之前的特异性DAB染色或造成组织损伤。②第一标DAB的棕黄色与第二标镍增强DAB的紫蓝色反差大、背景低；颠倒底物使用次序将损害双标质量。此外,双标切片可采用传统的中性树胶封片,染色结果能恒久保存。结论采用同一种酶标记系统建立了简便、可靠的免疫组化双标新方法。该方法标记结果清晰、操作简便、试剂易得,有较大应用价值。
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关键词
免疫组化辣根过氧化物酶二氨基联苯胺镍方法双重标记交叉反应immunohistochemistryhorseradish peroxidase3,3′-diaminobenzidineNickelmethoddouble labelingcross-reaction
栏目名称
实验方法学
DOI
10.3969/j.issn.1001-1978.2015.03.028
发布时间
2015-04-09
基金项目
国家自然科学基金资助项目
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