换一批miR-125 b甲基化在同型半胱氨酸促进血管平滑肌细胞增殖中的作用
Role of homocysteine to promote the vascular smooth muscle cell proliferation by MiR-125 b methylation
摘要目的：探讨同型半胱氨酸( homocysteine, Hcy)促进血管平滑肌细胞增殖中miR-125b甲基化的作用。方法原代培养人脐静脉平滑肌细胞( VSMCs ),并分为空白对照组(0μmol·L-1 Hcy),不同浓度Hcy干预组(50、100、200及500μmol·L-1 Hcy),以荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测 miR-125b的表达变化；利用miR-125b前体和抑制剂转染VSMCs后MTT法检测细胞增殖活性；生物信息学分析miR-125b启动子区CpG岛分布情况,巢式降落式甲基特异性PCR ( nt-MSP)法检测miR-125b甲基化状态的变化；并利用DNA甲基化酶抑制剂5-氮杂胞苷( AZC)干预细胞后再次检测miR-125b的表达。结果与对照组相比,100,200及500μmol· L-1 Hcy可使miR-125b的表达水平降低,差异有显著性( P<0．01)；miR-125b前体可以抑制VSMCs增殖,而miR-125b抑制剂可以促进VSMCs增殖(P<0．01)；以miR-125b基因上游3700 bp作为研究对象,生物信息学分析发现miR-125b启动子区含有一个长度为792bp(1881-2672区域)的 CpG岛,且在 Hcy 干预下 miR-125b 的甲基化水平增强( P <0．01)；而用AZC干预后,发现miR-125b表达上调,差异有显著性(P<0．05)。结论 Hcy可能通过下调miR-125b表达从而促进VSMCs增殖,可能通过上调miR-125b基因甲基化水平从而下调miR-125b表达。
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关键词
同型半胱氨酸miR-125bDNA甲基化血管平滑肌细胞动脉粥样硬化增殖homocysteinemiR-125 bDNA methyla-tionvascular smooth muscle cellatherosclerosisproliferation
医学主题词
甲基化(Methylation)半胱氨酸(Cysteine)肌, 平滑, 血管(Muscle, Smooth, Vascular)细胞增殖(Cell Proliferation)细胞(Cells)
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1001-1978.2015.07.027
发布时间
2015-08-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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