佐剂型关节炎大鼠滑膜成纤维细胞模型建立及特征分析

Establishment and characteristic analysis of fibroblast-like synoviocytes in rats with adjuvant arthritis

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摘要目的：建立佐剂型关节炎大鼠滑膜成纤维细胞（AA-FLS）原代培养方法及其特性分析，探讨 AA-FLS 作为 RA 体外研究细胞模型的可行性。方法采用热杀死结核分枝杆菌 H37Ra（Mtb）免疫 SD 大鼠，建立佐剂型关节炎大鼠模型，取大鼠双侧膝关节滑膜组织进行原代细胞培养，显微镜下观察细胞形态；免疫细胞化学方法鉴定细胞；CCK-8法检测细胞增殖活性；ELISA 方法测定细胞上清中 TNF-α和 IL-1β水平；Hochest 33258法检测细胞凋亡状态；Western bolt 方法检测 AA FLS 细胞线粒体凋亡通路重要调控蛋白 Bcl-2和 Bax及 Pro-caspase-3和 Cleave-caspase-3水平的表达。结果胶原酶法分离获得的滑膜成纤维细胞经传代纯化，呈梭形的细胞占0．95以上，免疫细胞化学鉴定显示滑膜成纤维细胞 vi-mentin 表达呈阳性，CD68表达为阴性；AA 模型大鼠滑膜成纤维细胞增殖活性较正常大鼠滑膜成纤维细胞增殖活性明显提高，细胞凋亡率降低；在培养的细胞上清中 TNF-α和 IL-1β水平明显升高；线粒体凋亡通路调控蛋白 Bcl-2水平明显升高，而 Bax 蛋白表达水平明显降低，同时 AA-FLS 细胞中pro-caspase-3表达量增加。结论AA-FLS 具有增殖活跃、凋亡抑制和分泌高水平促炎性细胞因子的生物特性，可作为体外筛选抗 RA 药物的细胞模型。