换一批S mad3 WT、S mad3 EPS M、S mad33 S-A 3种质粒稳转HepG2细胞株的建立与功能研究
Construction and functional study of three plasmids including Smad3 WT, Smad3 EPSM and Smad3 3S-A stably transfected HepG2 cell lines
摘要目的建立Smad3 WT、Smad3 EPSM及Smad33S-A 3种质粒稳转HepG2细胞株，探究单纯转染3种质粒及选择性上调pSmad3C、pSmad3L对HepG2细胞功能的影响。方法采用脂质体转染试剂盒将 Smad3 WT （野生型 Smad3基因）、Smad3 EPSM（Smad3L区磷酸化位点突变）、Smad33S-A （Smad3 C区磷酸化位点突变）3种质粒转染至HepG2细胞中，经G418筛选阳性细胞，Western blot法鉴定3种质粒稳转细胞株的转染效率。MTT法检测细胞增殖情况。流式细胞术检测细胞周期及凋亡。结果 Westernblot结果显示，转染相应质粒的HepG2细胞高表达目的蛋白，提示稳转细胞株构建成功。MTT 结果显示，在缺乏 TGF-β1刺激情况下，转染3种质粒后对HepG2细胞增殖几乎没有影响，TGF-β1能够诱导稳转细胞株的细胞增殖，且转染Smad3 EPSM质粒的HepG2细胞，较未转染、转染Smad3 WT或Smad33S-A质粒的 HepG2细胞对 TGF-β1诱导的细胞增殖反应减弱。细胞周期分析显示，TGF-β1刺激下，转染Smad3 EPSM质粒组G0／G1期细胞数明显增多，而转染 Smad33S-A 质粒组G2／M期细胞数增加明显。细胞凋亡检测显示，TGF-β1刺激下，较未转染和转染Smad3 WT质粒组，转染Smad3 EPSM质粒组细胞凋亡率明显增加，而转染Smad33S-A质粒组细胞凋亡率明显降低。结论成功建立Smad3 WT、Smad3 EPSM及Smad33S-A 3种质粒稳转HepG2细胞株，为进一步探讨开发能够经由调控pSmad3C、pSmad3L的药物提供一定的基础。
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关键词
Smad3 WT质粒Smad3 EPSM质粒Smad3 3S-A 质粒HepG2细胞稳定转染细胞增殖细胞周期细胞凋亡Smad3 WTSmad3 EPSMSmad3 3S-AHepG2 cellsstable transfectioncell proliferationcell cycleapoptosis
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1001-1978.2016.06.017
发布时间
2016-06-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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