换一批
换一批pEGFP-NTCP稳定转染HEK293细胞系的建立及鉴定
Establishment and identification of HEK293 cell lines with stable and high expression of NTCP
摘要目的：高效快速地建立稳定高表达钠离子－牛磺胆酸共转运多肽（sodium taurocholate cotransporting polypeptide， NTCP）的HEK293细胞系。方法构建可表达EGFP-NTCP融合蛋白的pEGFP-NTCP重组质粒，并利用FuGENE 6转染试剂将重组质粒转染至HEK293细胞中。用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白表达情况，挑选转染细胞进行14 d G418筛选和单克隆培养，以获得稳定转染细胞株。用RT-PCR法、qRT-PCR法和Western blot技术检测稳定转染细胞及正常细胞中NTCP mRNA和蛋白的表达情况，并进一步用超高效液相色谱－串联质谱法（UPLC-MS／MS）考察稳定转染细胞的牛磺胆酸摄取能力。结果使用本文优化的方法，细胞转染率可达90％。RT-PCR、qRT-PCR、Western blot和牛磺酸摄取实验结果显示：相对于正常组，在荧光显微镜下呈绿色荧光的转染细胞；其NTCP表达均显阳性（P＜0.01）；且稳定转染细胞的牛磺胆酸摄取能力明显升高（P＜0.05）。结论高效快速地建立了稳定高表达NTCP的HEK293细胞系，为胆酸衍生物摄取机制研究奠定了基础。
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关键词
NTCPEGFP稳定转染牛磺胆酸HEK293细胞高效快速NTCPEGFPstable transfectiontaurocholic acidHEK293 cellsefficient and fast
栏目名称
实验方法学
DOI
10.3969/j.issn.1001-1978.2016.12.025
发布时间
2017-01-10
基金项目
国家自然科学基金资助项目(No 81460523)
贵州省优秀青年科技人才培养对象专项基金(No 2013-45号)
贵州省社会发展攻关计划项目(No 2013-3031号)
贵州省中药现代化科技产业研究开发专项(No 2013-4001号)
贵州省科学技术基金
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